[發明專利]一種基于DNA組裝的恒溫條件下同時檢測多種microRNA的探針和方法

有效

• 申請號: 201810819681.2
• 申請日: 2018-07-24
• 公開（公告）號: CN109055524B
• 公開（公告）日: 2022-03-15
• 發明（設計）人: 戴宗;陳俊;呂品田;鄒小勇
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11;C12Q1/6816
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 胡輝;舒勝英

1.一種檢測microRNA的探針組，所述探針組包括Y-1n、Y-2n和熒光探針LP；探針Y-1n、Y-2n、LP和目標microRNA能夠自組裝形成穩定的“工”字形結構；

探針Y-1n中間的部分堿基與Y-2n中間的部分堿基反向互補配對，形成“工”字形中間部分的莖部序列；

探針Y-1n、Y-2n的另一部分堿基序列與目標microRNA的兩端序列分別反向互補配對，形成“工”字形一端的“一”字形頭部；

探針Y-1n、Y-2n中還存在能與熒光探針LP兩端序列分別發生反向互補配對的堿基序列，形成“工”字形另一端的“一”字形頭部；

熒光探針LP與目標microRNA不能配對結合；

熒光探針LP能被切刻內切酶切割；

熒光探針LP兩端分別連有報告熒光基團、淬滅熒光基團；

所述莖部序列中含有切刻內切酶的識別位點；

所述莖部序列的長度為7～9bp；

熒光探針LP的序列長度為10～18nt；

熒光探針LP被切刻內切酶切割后能從“工”字形結構中脫落。

2.根據權利要去1所述的探針組，其特征在于，當所述microRNA為miR-373、let-7a和miR-27a時，設計、合成的探針組如SEQ ID NO:2～4、SEQ ID NO:10～12、SEQ ID NO:14～16所示。

3.根據權利要求1或2所述的探針組，其特征在于，所述切刻內切酶包括Nt.BstNBI、Nt.BsmAI、Nt.AlwI。

4.一種非疾病診斷目的的檢測microRNA的方法，其特征在于，根據所有待檢測目標microRNA的序列，對所有目標microRNA分別設計、合成權利要求1～3任一項所述的探針組，將設計、合成的所有探針組、切刻內切酶與待檢測樣品混合，于35～50℃反應，然后測定各探針組中所帶熒光基團的熒光強度，根據熒光強度值以及相應標準曲線，計算樣品中各目標microRNA濃度。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，于35～50℃反應的時間為30～70min。

6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，切刻內切酶在整個反應體系中的濃度為0.36～0.7U/μL。

7.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，當目標microRNA為miR-373、let-7a和miR-27a時，設計、合成的探針組如SEQ ID NO:2～4、SEQ ID NO:10～12、SEQ ID NO:14～16所示。