[發明專利]一種遺傳性耳聾基因的檢測方法及檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201810818663.2
• 申請日: 2018-07-24
• 公開（公告）號: CN108977517A
• 公開（公告）日: 2018-12-11
• 發明（設計）人: 王文忠;張為;田軍龍;胡軍;陳蘇平
• 申請（專利權）人: 為康（蘇州）基因科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12Q1/6883
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369
• 代理人: 韓飛

本發明公開了一種遺傳性耳聾基因的檢測方法，包括以下步驟：提取樣本DNA；設計用于擴增遺傳性耳聾基因片段的特異性引物；利用單管多重PCR擴增反應得到目標片段；設計用于遺傳性耳聾基因片段的單堿基延伸引物；遺傳性耳聾基因片段單堿基延伸；核酸質譜分析測量目標DNA序列，能夠有效地對遺傳性耳聾基因篩查，幫助個體充分了解自己的遺傳狀況，提前采取相應的健康管理措施，能有效預防或延緩耳聾的發生。本發明還涉及一種遺傳性耳聾基因的檢測試劑盒。

技術領域

本發明涉及生物醫學領域，尤其是涉及一種遺傳性耳聾基因的檢測方法及檢測試劑盒。

背景技術

有60％的耳聾與遺傳因素有關，這其中又有70％為非綜合征性耳聾。常染色體基因有兩個等位基因，一個來自父方，一個來自母方，其中一個等位基因突變，稱“(單)雜合突變”；兩個等位基因突變，稱“復合雜合突變”或“純合突變”。與常染色基因線性結構不同，線粒體基因是環性結構，故線粒體基因突變表達方法也不同，常表示為“均質突變”或“異質突變”，前者可理解為純合突變，后者可理解為單雜合突變。基因堿基缺失(用Del，即delete表示)或替換(用“>”表示)構成病理性變異，稱為突變，導致基因功能異常，從而造成耳聾。

因缺乏精準的、高通量的基因突變篩查技術，進而阻礙了精準治療藥物的研發及臨床研究。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種遺傳性耳聾基因的檢測方法和檢測試劑盒。

本發明的目的采用以下技術方案實現：

一種遺傳性耳聾基因的檢測方法，包括以下步驟：提取樣本DNA；設計用于擴增遺傳性耳聾基因片段的特異性引物；利用單管多重PCR擴增反應得到目標片段；設計用于遺傳性耳聾基因片段的單堿基延伸引物；遺傳性耳聾基因片段單堿基延伸；核酸質譜分析測量所述目標DNA序列。

進一步地，所述遺傳性耳聾基因片段包括GJB2片段、SLC26A4片段、線粒體12srRNA片段。

進一步地，所述用于擴增遺傳性耳聾基因片段的特異性引物包括：用于擴增所述GJB2片段的特異性引物，正向引物為：SEQ ID Nos：1，反向引物為SEQ ID Nos：2；用于擴增所述SLC26A4片段的特異性引物，正向引物為：SEQ ID Nos：3，反向引物為SEQ ID Nos：4；用于擴增所述線粒體12s rRNA片段的特異性引物，正向引物為：SEQ ID Nos：3，反向引物為SEQ ID Nos：4。

進一步地，所述用于遺傳性耳聾基因片段的單堿基延伸引物包括：用于所述GJB2片段的單堿基延伸引物，序列為SEQ ID Nos：61；用于所述SLC26A4片段的單堿基延伸引物，序列為SEQ ID Nos：62；用于所述線粒體12s rRNA片段的單堿基延伸引物，序列為SEQ IDNos：62。

進一步地，所述利用單管多重PCR擴增反應包括以下步驟：Taq酶激活，DNA變性。

進一步地，所述Taq酶激活時溫度為95℃。

進一步地，所述Taq酶激活時間為15分鐘。

進一步地，所述DNA變性時溫度為95℃。

進一步地，DNA變性時間為15秒。

一種遺傳性耳聾基因的檢測試劑盒，包括：用于擴增遺傳性耳聾基因片段的特異性引物，所述特異性引物包括SEQ ID Nos：1、SEQ ID Nos：2、SEQ ID Nos：3、SEQ ID Nos：4；用于遺傳性耳聾基因片段的單堿基延伸引物，所述單堿基延伸引物包括SEQ ID Nos：61、SEQ ID Nos：62。