[發(fā)明專利]一種GLP-1（7-37）的合成方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810813731.6
• 申請日: 2018-07-23
• 公開（公告）號: CN108948179A
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳為光;丁彥偉;鄭范娜;嚴(yán)磊;秦超;王維為
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽省國平藥業(yè)有限公司
• 主分類號: C07K14/605
• 分類號: C07K14/605;C07K1/04;C07K1/06;A61P3/10;A61P3/04;A61P9/12;A61P3/06;A61P25/28;A61P9/10;A61P9/00;A61P1/00;A61P1/14;A61P1/04
• 代理公司: 北京和信華成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11390
• 代理人: 胡劍輝

1.一種GLP-1(7-37)的合成方法，其特征在于：該GLP-1(7-37)為：

7HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG37；

該GLP-1(7-37)的氨基酸序列為：

7His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH37；

該GLP-1(7-37)的合成方法合成方法為以下步驟：

S1、以2-Cl Resin為起始樹脂載體，經(jīng)活化劑和縮合劑的縮合反應(yīng)，由樹脂固相載體和N端Fmoc保護(hù)的甘氨酸(Fmoc-Gly-OH)偶聯(lián)得到Fmoc-Gly-2-Cl-Resin；

S2、通過固相合成法，按照GLP-1(7-37)主鏈肽序依次偶聯(lián)具有N端Fmoc保護(hù)且側(cè)鏈保護(hù)的氨基酸；

S3、裂解，脫除保護(hù)基和樹脂得到GLP-1(7-37)粗肽；

S4、純化，凍干，得到GLP-1(7-37)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種GLP-1(7-37)的合成方法，其特征在于：步驟S1中所述的起始氨基樹脂為2-Cl Resin，取代度為0.58-0.63mmol/g。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種GLP-1(7-37)的合成方法，其特征在于：步驟S1中縮合反應(yīng)過程中以DIC/HOBt為活化劑和縮合劑，縮合反應(yīng)時(shí)間為25min。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種GLP-1(7-37)的合成方法，其特征在于：步驟S2所述的固相合成法具體為：

(1)采用DBLK使所述Fmoc-Gly-2-Cl-Resin脫除Fmoc保護(hù)基，得到NH-Gly-2-Cl-Resin，所述DBLK由體積比為1:3的哌啶和DMF組成；

(2)在偶聯(lián)劑系統(tǒng)的存在下，NH-Gly-2-Cl-Resin和Fmoc保護(hù)且側(cè)鏈保護(hù)的精氨酸偶聯(lián)得到Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-2-Cl-Resin；

(3)重復(fù)步驟(1)、(2)，按照GLP-1(7-37)主鏈肽序依次進(jìn)行氨基酸的偶聯(lián)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種GLP-1(7-37)的合成方法，其特征在于：步驟S4中，純化為反相高效液相色譜純化，色譜柱為反相C18柱，柱溫為35℃，采用流動(dòng)相：A 0.1％三氟乙酸/水，B 0.1％三氟乙酸/乙腈，在214nm下按照如下程序進(jìn)樣分析：Time/min B.Cone/％

0.00 20

30 65

其中，流速為1.0ml/min。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種GLP-1(7-37)的合成方法，其特征在于：該GLP-1(7-37)用于制備治療或預(yù)防高血糖癥、2型糖尿病、葡萄糖耐量降低、1型糖尿病、肥胖癥、高血壓、X綜合征、血脂障礙、認(rèn)知障礙、動(dòng)脈粥樣硬化、心肌梗塞、冠心病和其它心血管疾病、中風(fēng)、炎性腸綜合征、消化不良和胃潰瘍的藥物。