[發(fā)明專利]膠原蛋白海綿在制備促進傷口愈合藥物中的應(yīng)用及其理化性質(zhì)檢測方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810812939.6
• 申請日: 2018-07-23
• 公開（公告）號: CN108904861A
• 公開（公告）日: 2018-11-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 艾育勝;艾婧;陳天時;李驥琛
• 申請（專利權(quán)）人: 天津市長江醫(yī)療器械有限公司
• 主分類號: A61L15/32
• 分類號: A61L15/32;A61L15/42;G01N1/28;G01N1/34;G01N1/38;G01N5/02;G01N5/04;G01N11/00;G01N15/02;G01N21/84;G01N23/22;G01N23/2202;G01N23/2206
• 代理公司: 北京萬思博知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11694
• 代理人: 范曉斌

1.膠原蛋白海綿在制備促進傷口愈合藥物中的應(yīng)用。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用通過以下任一種或多種作用機理實現(xiàn)：

A.起支撐作用，用以形成細胞外支架，束縛細胞，影響其游走、異化和生物合成；

B.通過成纖維細胞的聚集促進結(jié)締組織修復；對創(chuàng)面細胞有趨向活性，誘導成纖維細胞、血管內(nèi)皮細胞、炎癥細胞等向創(chuàng)傷部位移動，激活巨噬細胞的吞噬功能，提高機體的免疫活性，降低創(chuàng)面被感染的機會；

C.通過單體膠原分子排列而成的纖維結(jié)構(gòu)，吸附血小板，誘導血小板聚集，產(chǎn)生釋放反應(yīng)，激活了生理止血作用；

D.通過膠原的纖維結(jié)構(gòu)使血細胞粘附，形成血栓凝塊形成血痂，在破損的創(chuàng)面血管上堆積了障礙物，防止血流沖開破損的傷口；酶處理可以使抗原性更加降低，隔離微生物；

F.促使受損血小板細胞釋放亞細胞顆粒及分泌物，產(chǎn)生凝血惡烷及凝血酶；

G.激活和偶聯(lián)生長因子，促進成纖維細胞活性和膠原纖維的產(chǎn)生和排列，促進肉芽組織的產(chǎn)生；

H.活化凝血因子XII使之轉(zhuǎn)化為凝血因子XIIa，與XIIa一起使凝血因子XI轉(zhuǎn)化成因子XIa，增加與血小板在一起的因子V的活化，使血小板內(nèi)已活化的因子V暴露出來，最終產(chǎn)生凝血酶，凝血酶在催化纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白，完成血液凝固；

I.最終降解為機體修復細胞所必需的氨基酸，為創(chuàng)面修復提供營養(yǎng)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述膠原蛋白海綿是通過以下步驟制備得到：

(1)膠原蛋白原材料進行前處理；

(2)膠原蛋白原材料的前提??；

(3)酶解、低溫離心、鹽析純化、透析、真空均質(zhì)得膠原蛋白；

(4)制備膠原蛋白海綿；

(5)將膠原蛋白海綿進行內(nèi)包裝、滅菌、外包裝。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于：

步驟(1)中，所述前處理為：將經(jīng)檢驗合格、健康牛的跟腱中的筋膜、脂肪、肌肉剔掉，用自來水沖洗干凈，切成厚度不超過1mm的薄片；

步驟(2)中，所述前提取為：將前處理后的膠原蛋白原料放入7-12℃純化水中浸泡，浸泡不少于16小時，用純化水沖洗至溶液呈澄清狀態(tài)；

步驟(3)中，所述酶解的酶解液配置比例為：750-800L純化水，加28-32L冰乙酸，加50-55g胃蛋白酶充分攪拌后控制pH值在2.5-3.5；所述酶解步驟為：將經(jīng)前提取的膠原蛋白原材料與酶解液投入酶解罐中，充分攪拌，酶解時間不少于72小時；

所述低溫離心為：4℃，3000轉(zhuǎn)/分，離心時間為20分鐘；收集上清液；

所述鹽析純化為：將低溫離心所得上清液加入NaCl溶液中，析出白色絮狀膠原蛋白；所述NaCl溶液需要360目的過濾網(wǎng)過濾，濾網(wǎng)應(yīng)消毒后使用，以除去雜質(zhì)，提高NaCl溶液的純度；

所述透析的透析液為磷酸鹽緩沖液，透析液pH值在2.5-3.5范圍內(nèi)；所述透析步驟為：將透析袋裁切成350mm長并用純化水泡洗干凈，再用沸水蒸煮2小時，將鹽析純化的膠原蛋白裝入截流分子量12000-14000的透析袋中透析；

所述真空均質(zhì)為：將透析后pH值5.0-5.5范圍內(nèi)的膠原蛋白放入真空均質(zhì)機中，轉(zhuǎn)數(shù)控制在70-80轉(zhuǎn)/分，真空度設(shè)定在-0.9Pa，真空至無氣泡；

步驟(4)中，所述制備膠原蛋白海綿具體步驟為：將經(jīng)均質(zhì)后的膠原蛋白裝入已滅菌的凍干盤中，然后將凍干盤裝入凍干機干燥箱中；制品從室溫冷凍到-40℃以下，保溫不少于4小時，進入真空作業(yè)，真空狀態(tài)下自然升溫到5℃后加熱升溫至30-40℃，使制品成白色海綿片狀。

5.一種膠原蛋白海綿的理化性質(zhì)檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)膠原蛋白海綿的物理性質(zhì)檢測，包括膠原蛋白海綿的外觀及表面結(jié)構(gòu)觀察，吸水能力，單位體積質(zhì)量的檢測；

(2)膠原蛋白海綿的化學性質(zhì)檢測，包括pH值測定，總蛋白與羥脯氨酸含量測定，熾灼殘渣、砷含量、重金屬含量、酸堿度、易氧化物的測定。