[發(fā)明專利]一種番石榴葉黃酮苷元的生產(chǎn)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810804985.1
• 申請(qǐng)日: 2018-07-20
• 公開（公告）號(hào): CN108977475B
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳學(xué)玲;曾偉民;周翔宇;周智廣;胡芳;謝志國;羅奎;李交昆;申麗;余潤(rùn)蘭;劉元東;劉阿娟;邱冠周
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中南大學(xué);中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12P17/06
• 分類號(hào): C12P17/06;C12R1/545
• 代理公司: 長(zhǎng)沙朕揚(yáng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 43213
• 代理人: 錢朝輝

本發(fā)明公開了一種番石榴葉黃酮苷元的生產(chǎn)方法，包括以下步驟：(1)從番石榴葉中提取黃酮類化合物；(2)將步驟(1)中得到的黃酮類化合物加入到含灰色鏈霉菌(Streptomyces griseus)的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，振蕩發(fā)酵培養(yǎng)得到發(fā)酵溶液；(3)將步驟(2)中得到的發(fā)酵溶液振蕩酶解得到酶解溶液；(4)將步驟(3)中得到的酶解溶液靜置、離心，沉淀用甲醇溶解，過濾后得到含有黃酮苷元的甲醇溶液。本發(fā)明番石榴葉黃酮苷元的生產(chǎn)方法簡(jiǎn)便、易于操作，最終得到的黃酮苷元的雜質(zhì)含量小，后續(xù)提純工藝簡(jiǎn)單。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于番石榴領(lǐng)域，尤其涉及一種番石榴葉提取物的生產(chǎn)方法。

背景技術(shù)

番石榴(Psidium guaijava L.)為桃金娘科番石榴屬植物，是熱帶常綠小喬木或灌木，原產(chǎn)于熱帶美洲，幾個(gè)世紀(jì)前傳入我國，現(xiàn)在我國福建、廣東、臺(tái)灣等地均有廣泛的種植。中醫(yī)認(rèn)為其性平味干澀，具有收斂止瀉等功能，其揮發(fā)油具有抗菌、抗病毒作用，對(duì)消化系統(tǒng)也有解痙、增強(qiáng)胃腸蠕動(dòng)的作用。現(xiàn)代研究表明，番石榴中含有多種重要的芳香類二級(jí)代謝產(chǎn)物如多酚黃酮類化合物，有學(xué)者認(rèn)為正是這些酚類化合物賦予番石榴多種藥用功效。因而，針對(duì)番石榴葉的黃酮苷元資源進(jìn)行開發(fā)研究有較好的前景與必要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服以上背景技術(shù)中提到的不足和缺陷，提供一種成本低、品質(zhì)高的番石榴葉黃酮苷元的生產(chǎn)方法。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提出的技術(shù)方案為：

一種番石榴葉黃酮苷元的生產(chǎn)方法，包括以下步驟：

(1)從番石榴葉中提取黃酮類化合物；

(2)將步驟(1)中得到的黃酮類化合物加入到含灰色鏈霉菌(Streptomycesgriseus ATCC13273)的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，于25-40℃條件下，振蕩發(fā)酵培養(yǎng)6-8天得到發(fā)酵溶液；

(3)將步驟(2)中得到的發(fā)酵溶液于50-55℃條件下，振蕩酶解3-4h得到酶解溶液；

(4)將步驟(3)中得到的酶解溶液靜置、離心，沉淀用甲醇溶解，過濾后得到含有黃酮苷元的甲醇溶液。

上述番石榴葉黃酮苷元的生產(chǎn)方法中，灰色鏈霉菌首先需要先以馬鈴薯培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)當(dāng)作種子，再接種至新的馬鈴薯培養(yǎng)基。

上述番石榴葉黃酮苷元的生產(chǎn)方法中，優(yōu)選的，所述含灰色鏈霉菌的液體培養(yǎng)基為標(biāo)準(zhǔn)馬鈴薯培養(yǎng)基，其配方為：去皮新鮮馬鈴薯200g、葡萄糖20g、MgSO₄·7H₂O 1.5g、KH₂PO₄ 3g、1L蒸餾水，所述標(biāo)準(zhǔn)馬鈴薯培養(yǎng)基的初始pH值無需調(diào)節(jié)。通過灰色鏈霉菌代謝產(chǎn)生的鼠李糖苷酶和β-D-葡萄糖苷酶等，會(huì)使提取物中的黃酮糖苷成分通過微生物發(fā)酵作用轉(zhuǎn)化生成黃酮苷元(槲皮素、山奈酚和異鼠李素等)，以微生物進(jìn)行轉(zhuǎn)化，可以增加產(chǎn)物量，克服化學(xué)合成的缺點(diǎn)，又因微生物發(fā)酵大多在中性、室溫條件下作用，減少了產(chǎn)物異構(gòu)、消旋和重排反應(yīng)等不利因素。

上述番石榴葉黃酮苷元的生產(chǎn)方法中，優(yōu)選的，所述含灰色鏈霉菌的液體培養(yǎng)基中灰色鏈霉菌的接種量為每毫升培養(yǎng)基中接種10000-60000個(gè)孢子。更優(yōu)選的，為10000-60000個(gè)孢子。

上述番石榴葉黃酮苷元的生產(chǎn)方法中，優(yōu)選的，所述步驟(2)中，所述黃酮類化合物的加入量與液體培養(yǎng)基的質(zhì)量比控制為(0.5-1.5)：5。