[發明專利]一種番石榴葉黃酮苷元的生產方法

有效

• 申請號: 201810804985.1
• 申請日: 2018-07-20
• 公開（公告）號: CN108977475B
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發明（設計）人: 吳學玲;曾偉民;周翔宇;周智廣;胡芳;謝志國;羅奎;李交昆;申麗;余潤蘭;劉元東;劉阿娟;邱冠周
• 申請（專利權）人: 中南大學;中南大學湘雅二醫院
• 主分類號: C12P17/06
• 分類號: C12P17/06;C12R1/545
• 代理公司: 長沙朕揚知識產權代理事務所(普通合伙) 43213
• 代理人: 錢朝輝

1.一種番石榴葉黃酮苷元的生產方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）從番石榴葉中提取黃酮類化合物；

（2）將步驟（1）中得到的黃酮類化合物加入到含灰色鏈霉菌（Streptomyces griseus）的液體培養基中培養，振蕩發酵培養得到發酵溶液；

（3）將步驟（2）中得到的發酵溶液振蕩酶解得到酶解溶液；

（4）將步驟（3）中得到的酶解溶液靜置、離心，沉淀用甲醇溶解，過濾后得到含有黃酮苷元的甲醇溶液；

所述步驟（1）中從番石榴葉中提取黃酮類化合物的方法為微波輔助低共熔提取技術，其工藝條件為：用200W微波強度處理番石榴葉2min后，以丁二醇和氯化膽堿按照摩爾體積比為4：1比例混合作為低共熔溶劑，控制料液比為1：22，65℃下提取40min；

所述步驟（1）中黃酮類化合物還經過高速逆流色譜技術分離純化過程，其工藝條件為：將石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水作為兩相溶劑體系，其各組分按照體積比為2∶2∶3∶1的比例配制，靜置6-10h得到分別作為上、下相的溶液組分，用最大流速將上相注入HSCCC分離管中，待上相充滿整個管路后調整主機轉速為720r/min，再以1.5mL/min流速注入下相；待流動相從柱出口流出，兩相在分離管中達到動態平衡后，由進樣閥注入經超聲波提取技術得到的溶液；

所述步驟（3）中振蕩酶解時采用纖維素酶與果膠酶的混合溶劑。

2.根據權利要求1所述的番石榴葉黃酮苷元的生產方法，其特征在于，所述含灰色鏈霉菌的液體培養基為標準馬鈴薯培養基，其配方為：去皮新鮮馬鈴薯200g、葡萄糖20g、MgSO₄·7H₂O 1.5g、KH₂PO₄ 3g、1L蒸餾水。

3.根據權利要求1所述的番石榴葉黃酮苷元的生產方法，其特征在于，所述含灰色鏈霉菌的液體培養基中灰色鏈霉菌的接種量為每毫升培養基中接種500-200000個孢子。

4.根據權利要求3所述的番石榴葉黃酮苷元的生產方法，其特征在于，所述含灰色鏈霉菌的液體培養基中灰色鏈霉菌的接種量為每毫升培養基中接種10000-60000個孢子。

5.根據權利要求1所述的番石榴葉黃酮苷元的生產方法，其特征在于，所述步驟（2）中，所述黃酮類化合物的加入量與液體培養基的質量比控制為（0.5-1.5）：5。

6.根據權利要求1-5中任一項所述的番石榴葉黃酮苷元的生產方法，其特征在于，所述步驟（1）中的黃酮類化合物經冷凍干燥后再加入含灰色鏈霉菌的液體培養基中培養。