[發明專利]一種高分辨生物檢測成像方法

在審

• 申請號: 201810801905.7
• 申請日: 2018-07-19
• 公開（公告）號: CN109030454A
• 公開（公告）日: 2018-12-18
• 發明（設計）人: 王毅;胡永奇;張慶文
• 申請（專利權）人: 溫州森佰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65;G01N21/552
• 代理公司: 浙江納祺律師事務所 33257
• 代理人: 朱德寶

本發明公開了一種高分辨生物檢測成像方法，將激光聚焦到第一顯微鏡物鏡的后焦面；將第一顯微鏡物鏡出射的平行光經過匹配油層；將經過匹配油層的光線耦合進入到SPR傳感芯片，SPR傳感芯片背向光線的一側放置有待測樣品；將激光經過SPR傳感芯片耦合到待測樣品一側，待測樣品在激光的作用下產生拉曼散射信號；SPR傳感芯片反射光線；將拉曼散射信號經過第二顯微鏡物鏡，被拉曼光譜儀接收；SPR傳感芯片反射光線，通過第一顯微物鏡出射，被反射圖像傳感器接收；將拉曼光譜儀和反射圖像傳感器的成像共同使用進行定量和定性分析。本發明既可以利用表面等離子體共振技術實現目標分子的定量分析，又可以利用表面增強拉曼光譜技術實現目標分子的定性分析。

技術領域

本發明涉及一種成像方法，更具體的說是涉及一種高分辨生物檢測成像方法。

背景技術

表面等離子體共振(SPR)技術在免疫檢測、藥物代謝、及其蛋白質動力學、醫療診斷、生物檢測、納米科技等領域有著非常重要的應用?，F有基于表面等離子體共振技術的檢測設備具有免標記、高分辨、快速實時檢測等優點。但是大部分基于表面等離子體共振技術的檢測設備都是通過旋轉電機實現大角度的光入射到一個棱鏡的表面，進而滿足波矢匹配條件得到表面等離子體共振，再利用這種技術進行檢測。而這種結構的缺點就是體積龐大笨重，且無法實現高分辨的成像檢測。同時單純的表面等離子體共振技術檢測設備只能檢測物質折射率的變化，卻不能定性分析物質的成分，使得這種設備的應用極其有限。

發明內容

針對現有技術存在的不足，本發明的目的在于提供一個高數值孔徑的顯微物鏡，結合了表面等離子體共振和表面增強拉曼光譜技術，可以利用該設備實現細胞內分子高分辨實時檢測成像，既可以利用表面等離子體共振技術實現目標分子相互作用及定量分析，又可以利用表面增強拉曼光譜技術實現目標分子的定性分析。

為實現上述目的，本發明提供了如下技術方案：

一種高分辨生物檢測成像方法，包括下述步驟：

步驟一：將激光聚焦到第一顯微鏡物鏡的后焦面；

步驟二：將第一顯微鏡物鏡出射的平行光經過配油層；

步驟三：將經過配油層的光線耦合進入到表面等離子體共振芯片，表面等離子體共振芯片背向光線的一側放置有待測樣品；

步驟四：將激光經過表面等離子體共振芯片耦合到待測樣品一側，待測樣品在激光的作用下產生拉曼散射信號；表面等離子體共振芯片反射光線；

步驟五：將拉曼散射信號經過第二顯微鏡物鏡，被拉曼光譜儀接收；表面等離子體共振芯片反射光線，通過第一顯微物鏡出射，被反射圖像傳感器接收；

步驟六：將拉曼光譜儀和反射圖像傳感器的成像共同使用進行定量和定性分析。通過上述技術方案，激光聚焦在第一顯微鏡物鏡的后焦面，之后通過配油層，經過配油層的光線平行入射到表面等離子體共振芯片上，表面等離子體共振芯片一部分光被反射，反射的部分被反射圖像傳感器接收，同時激光耦合到待測樣品激發產生出拉曼散射信號，拉曼散射信號經過第二顯微鏡物鏡的放大被拉曼光譜儀接收，這樣就一次性獲得了拉曼成像和SPR成像的圖像，從而可以更加準確的對樣品進行定性和定量的分析。

作為本發明的進一步改進，

步驟一中，激光經過入射角調整組件和分束器后聚焦于顯微鏡物鏡的后焦面上，所述入射角調整組件包括偏振片、設置于偏振片光路前端的準直透鏡、設置于偏振片光路后端的聚光透鏡，來調整和聚焦激光，同時可以調整激光的入射角度，然后進入到分束器中，分束器反射光線到第一顯微物鏡中。

通過上述技術方案，通過將激光先經過入射角度調整組件，通過改變偏振片、準直透鏡和聚光透鏡的距離，調整激光的聚焦位置，入射光經過入射角調整組件和分束器后聚焦于光學顯微物鏡的后聚焦面上。而分束器一方面反射激光至傳感芯片上，另一方面從傳感芯片反射回來的光束經過分束器，被反射圖形傳感器接收。