[發(fā)明專利]一種牛源性抗金黃色葡萄球菌融合抗體scFv-Fc及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810801037.2
• 申請日: 2018-07-20
• 公開（公告）號: CN109021109A
• 公開（公告）日: 2018-12-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱建國;王曼;王婷婷;王鳳青;張波
• 申請（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)
• 主分類號: C07K16/46
• 分類號: C07K16/46;C12N15/73;A61K39/40;A61P31/04;A61P15/14;G01N33/569
• 代理公司: 上海恒慧知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 31317
• 代理人: 張寧展

1.一種牛源性抗金黃色葡萄球菌融合抗體scFv-Fc，其特征在于，其至少具有如SEQ IDNo：1所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；如SEQ ID No：2所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)；如SEQID No：3所示氨基酸序列的Fc片段。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的牛源性抗金黃色葡萄球菌融合抗體scFv-Fc，其特征在于：位于重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)之間的中間連接肽為GGGGSGGGGSGGGGS。

3.根據(jù)權(quán)力要求1所述的牛源性抗金黃色葡萄球菌融合抗體scFv-Fc，其特征在于：所述的融合抗體具有如SEQ ID No：4所示的氨基酸序列。

4.一種牛源性抗金黃色葡萄球菌融合抗體scFv-Fc的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)采用RT-PCR直接從患奶牛乳腺炎的外周血單個(gè)淋巴細(xì)胞RNA中擴(kuò)增出抗體編碼基因的重鏈可變區(qū)基因VH和輕鏈可變區(qū)VL基因；

(2)利用SOE-PCR法將linker與VH基因和VL基因相連構(gòu)建牛源性單鏈抗體基因；

(3)將步驟(2)的牛源性單鏈抗體基因克隆到噬菌粒載體pCANTAB5E中，構(gòu)建重組質(zhì)粒；

(4)將步驟(3)的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌，培養(yǎng)并用輔助噬菌體擴(kuò)增建立初級單鏈抗體文庫；

(5)用金黃色葡萄球菌全菌作為包被抗原，富集淘選四輪；

(6)采用phage ELISA,用金黃色葡萄球菌全菌作為包被抗原，篩選陽性克隆；

(7)擴(kuò)增牛IgG Fc片段，所擴(kuò)增的Fc片段包含Hinge、CH2和CH3區(qū)域；

(8)將步驟(6)中篩選到的陽性scFv克隆、Fc片段與pET-28a(+)載體連接構(gòu)建重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化Rosetta細(xì)胞后，進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)所得產(chǎn)物即獲得所述牛源性抗金黃色葡萄球菌的融合抗體scFv-Fc。

5.一種牛源性抗金黃色葡萄球菌融合抗體scFv-Fc在制備介導(dǎo)外周血吞噬細(xì)胞對金黃色葡萄球菌吞噬作用藥物中的應(yīng)用。

6.一種牛源性抗金黃色葡萄球菌融合抗體scFv-Fc在制備治療奶牛乳腺炎藥物、或奶牛乳腺炎的診斷試劑和診斷試劑盒中的應(yīng)用。

7.一種牛源性抗金黃色葡萄球菌融合抗體scFv-Fc在制備在用于制備奶牛乳腺炎的預(yù)防、治療藥物中的應(yīng)用。