[發(fā)明專利]一種大豆及其制品核酸的快速提取方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810799201.0
• 申請日: 2018-07-19
• 公開（公告）號: CN110734906A
• 公開（公告）日: 2020-01-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 伍輝;吳堅(jiān)
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 33100 浙江杭州金通專利事務(wù)所有限公司
• 代理人: 劉曉春

本發(fā)明公開了一種大豆及其制品核酸的快速提取方法，能夠在常溫狀態(tài)下經(jīng)過10分鐘就可以完成大豆或其制品的核酸提取。裂解液中使用了高濃度的乙二胺四乙酸二鈉，以消除豆制品中雜質(zhì)成分對后續(xù)核酸擴(kuò)增的影響。同時(shí)，在使用裂解液裂解大豆及其制品時(shí)，由于固溶物較多，核酸與雜質(zhì)無法分離，傳統(tǒng)方法必須采用復(fù)雜的分離方法和手段。在本發(fā)明中，我們研究表明，當(dāng)加入三氯甲烷后，即可使豆制品的固溶物與核酸分離，從而只需簡單離心就可以獲得較好的核酸提取物，為后續(xù)核酸擴(kuò)增提供原料。該方法簡單、快速，容易將雜質(zhì)與大豆及其制品的核酸分離，并且是在常溫狀態(tài)下完成，反應(yīng)條件溫和且容易實(shí)現(xiàn)，對大豆及其制品的核酸快速檢測具有極其重要的意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于核酸擴(kuò)增和檢測的領(lǐng)域，其具體內(nèi)容涉及到一種新型的在常溫下進(jìn)行大豆核酸的快速提取方法以及可用于PCR或LAMP的擴(kuò)增體系進(jìn)行核酸快速檢測。

背景技術(shù)

在核酸檢測過程中，首先需要對核酸進(jìn)行提取。傳統(tǒng)的核酸提取方法有SDS法、PVP法、SDS-PVP法、CTAB法、硅土法、酚-三氯甲烷法等，但是，這些方法通常需要1～2小時(shí)，而且操作步驟繁瑣，大大降低了核酸提取效率。市場上常賣的一些核酸提取試劑盒(離心柱型)，提取過程一般也需要1小時(shí)左右，而且步驟較多，不易操作，不利于實(shí)現(xiàn)核酸快速檢測。

快速、簡單的核酸提取是實(shí)現(xiàn)核酸快速檢測的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。目前，已有一些報(bào)道關(guān)于大豆及其制品核酸提取方法，如采用強(qiáng)堿、胍鹽等作為裂解液與待測樣本混勻，然后加熱、高速離心，取上清獲得大豆核酸提取物。雖然這些方法大大縮短了核酸提取時(shí)間，但是，由于其需要加熱設(shè)備進(jìn)行加熱，提高了操作成本，且無法很好的將一些雜質(zhì)與核酸進(jìn)行分離，從而，對后續(xù)的擴(kuò)增效果造成很大影響等。

因此，開發(fā)一種簡單、常溫、快速、易于將雜質(zhì)與核酸分離的大豆及其制品核酸提取方法并應(yīng)用于大豆核酸快速檢測具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于，針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，提供一種新型的可應(yīng)用于大豆核酸是快速提取方法，并可將其應(yīng)用于PCR或LAMP擴(kuò)增體系進(jìn)行檢測。

為此，本發(fā)明的上述目的通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：

一種大豆及其制品核酸的快速提取方法，所述大豆及其制品核酸的快速提取方法包括如下步驟：

首先，將大豆或其制品研磨成粉狀樣品，在常溫下與裂解液進(jìn)行混勻，靜置一段時(shí)間；然后，加入三氯甲烷進(jìn)行混勻；最后，離心吸取上清，即獲得核酸提取物。

在采用上述技術(shù)方案的同時(shí)，本發(fā)明還可以采用或者組合采用以下進(jìn)一步的技術(shù)方案：

所述裂解液為氫氧化鈉與高濃度乙二胺四乙酸二鈉的混合液體。

優(yōu)選地，氫氧化鈉的濃度為0.05M～1M，乙二胺四乙酸二鈉的濃度為100mM～150mM；更優(yōu)選地，氫氧化鈉的濃度為0.2M～0.8M，乙二胺四乙酸二鈉的濃度為110mM～140mM；最優(yōu)選地，氫氧化鈉的濃度為0.4M～0.6M，乙二胺四乙酸二鈉的濃度為120mM～130mM。

優(yōu)選地，樣品與裂解液的質(zhì)量體積比為4:9～4:18；更優(yōu)選地，樣品與裂解液的質(zhì)量體積比為4:9～4:14；最優(yōu)選地，樣品與裂解液的質(zhì)量體積比為4:10～4:12。

優(yōu)選地，樣品與裂解液混勻后，靜置時(shí)間為1～5min；更優(yōu)選地，靜置時(shí)間為2～4min；最優(yōu)選地，靜置時(shí)間為2～3min。

優(yōu)選地，三氯甲烷與裂解液的體積比為2:7～7:7；更優(yōu)選地，三氯甲烷與裂解液的體積比為3:7～6:7；最優(yōu)選地，三氯甲烷與裂解液的體積比為4:7～6:7。

優(yōu)選地，離心轉(zhuǎn)速為8000rpm～15000rpm，時(shí)間為2～8min；更優(yōu)選地，離心轉(zhuǎn)速為9000rpm～14000rpm，時(shí)間為4～7min；最優(yōu)選地，離心轉(zhuǎn)速為11000rpm～13000rpm，時(shí)間為4～6min。