[發(fā)明專(zhuān)利]一種用于檢測(cè)不結(jié)球白菜抗根腫病的SNP分子標(biāo)記及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810798862.1
• 申請(qǐng)日: 2018-07-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108546777B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-06-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱紅芳;李曉鋒;朱玉英;翟文
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6895
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 上海碩力知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31251
• 代理人: 劉紅梅

1.一種用于檢測(cè)不結(jié)球白菜抗根腫病的SNP分子標(biāo)記，其特征在于：所述SNP分子標(biāo)記為Br_K_070103，該Br_K_070103位于不結(jié)球白菜第7號(hào)染色體第201813113位堿基處，該處堿基為G的不結(jié)球白菜表現(xiàn)為抗病，該處堿基為T(mén)的不結(jié)球白菜表現(xiàn)為感病；所述分子標(biāo)記Br_K_070103的序列如SEQ ID NO.1所示。

2.用于檢測(cè)權(quán)利要求1所述的SNP分子標(biāo)記的特異性引物組合，其特征在于，包括：

(1)兩條特異引物PrimerX和PrimerY：引物PrimerX的序列如SEQ ID NO.2所示，引物PrimerY的序列如SEQ ID NO.3所示；

(2)一條通用引物PrimerC：其序列如SEQ ID NO.4所示。

3.權(quán)利要求2所述的特異性引物組合在檢測(cè)不結(jié)球白菜品種抗根腫病性狀中的應(yīng)用。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的特異性引物組合在檢測(cè)不結(jié)球白菜品種抗根腫病性狀中的應(yīng)用，其特征在于，包括如下步驟：

(1)提取待測(cè)不結(jié)球白菜基因組DNA；

(2)以不結(jié)球白菜基因組DNA為模板，利用權(quán)利要求2所述的特異性引物組合進(jìn)行KASP反應(yīng)檢測(cè)，在兩條特意性引物PrimerX和PrimerY的5’-端分別連接FAM-tail:5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCT-3’和VIC-tail:5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATT-3’通用熒光標(biāo)簽序列；

(3)檢測(cè)不結(jié)球白菜品種抗根腫病性狀時(shí)，若只檢測(cè)到引物PrimerY所連熒光序列對(duì)應(yīng)的熒光信號(hào)，則待測(cè)不結(jié)球白菜表現(xiàn)為抗根腫病；若只檢測(cè)到引物PrimerX所連熒光序列對(duì)應(yīng)的熒光信號(hào)，則判定待測(cè)不結(jié)球白菜為不抗病材料；若同時(shí)檢測(cè)到兩者熒光則判斷不結(jié)球白菜為抗根腫病的雜合型。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的特異性引物組合在檢測(cè)不結(jié)球白菜品種抗根腫病性狀中的應(yīng)用，其特征在于：選擇檢測(cè)到引物PrimerY所連熒光序列對(duì)應(yīng)的熒光信號(hào)的不結(jié)球白菜樣品進(jìn)行育種。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的特異性引物組合在檢測(cè)不結(jié)球白菜品種抗根腫病性狀中的應(yīng)用，其特征在于，步驟(2)中KASP檢測(cè)中的PCR條件為：94℃15min；95℃20sec，65-56℃60sec，每個(gè)循環(huán)退火延伸溫度降低0.8℃，共10個(gè)循環(huán)；94℃20sec，57℃60sec，共26個(gè)循環(huán)。

7.權(quán)利要求2所述的特異性引物組合用于檢測(cè)所述SNP分子標(biāo)記的方法，該方法為：

利用權(quán)利要求2所述的特異性引物組合對(duì)待檢測(cè)不結(jié)球白菜的基因組DNA進(jìn)行KASP檢測(cè)，在引物PrimerX和引物PrimerY的5’-端分別連接不同的通用熒光標(biāo)簽序列；若只檢測(cè)到引物PrimerY所連熒光序列對(duì)應(yīng)的熒光信號(hào)，則待測(cè)不結(jié)球白菜為抗根腫病材料，其基因型為G，若只檢測(cè)到引物PrimerX所連熒光序列的熒光信號(hào)，則判定待測(cè)不結(jié)球白菜為不抗根腫病的材料，其基因型為T(mén)；若同時(shí)檢測(cè)到兩種熒光，則判定不結(jié)球白菜樣品為攜帶抗根腫病性狀的雜合型。

8.包含權(quán)利要求2所述的特異性引物組合的試劑盒。

9.權(quán)利要求8所述的試劑盒在不結(jié)球白菜種質(zhì)資源改良中的應(yīng)用。

10.權(quán)利要求8所述的試劑盒在培育抗根腫病不結(jié)球白菜中的應(yīng)用。