[發明專利]一種含有FLAG蛋白融合標簽的植物表達質粒載體及其載體的構建方法

在審

• 申請號: 201810798051.1
• 申請日: 2018-07-19
• 公開（公告）號: CN108913715A
• 公開（公告）日: 2018-11-30
• 發明（設計）人: 江文波;龐永珍
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N15/66
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙) 11548
• 代理人: 黃玉玨

本發明公開的一種含有FLAG蛋白融合標簽的植物表達質粒載體，為在植物表達質粒載體的C端含有FLAG蛋白融合標簽的植物表達質粒載體。構建所述質粒載體方法，包括如下步驟：(1)以pCAMBIA1302為出發質粒，采用SpeI和Eco065I酶切該質粒，通過凝膠電泳切膠回收大片段；(2)全序列合成包含編碼3個FLAG蛋白的核苷酸序列；(3)設計擴增引物；(4)在N端加上SpeI酶切位點，在C端加上Eco065I酶切位點；用SpeI和Eco065I酶切該合成片段；最后連接產物，熱激轉化DH5α,通過PCR鑒定得到陽性克隆。本發明的優點在于，得到小蛋白的融合標簽的植物表達質粒載體，進而幫助使用者快速的研究蛋白功能，并且不會對目標蛋白自身的功能發生干擾，保證能夠準確地研究蛋白的功能。

技術領域

本發明涉及分子生物學技術領域，具體為一種含有FLAG蛋白融合標簽的植物表達質粒載體及其載體的構建方法。

背景技術

FLAG標簽蛋白，是一個含8個氨基酸的親水性多肽的小標簽，標簽序列Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys，這8個氨基酸作為抗原表位表達可識別其相應抗體。而FLAG等小的蛋白融合標簽，不會或很少會對融合的蛋白功能產生干擾。而要將FLAG融合蛋白標簽規模化、產業化推廣，勢必要提供一種帶有常用的融合蛋白標簽的植物表達質粒載體。pCAMBIA的一系列載體被全球許多植物分子生物學實驗室廣泛使用。隨著基因功能和蛋白功能研究的興起，重組蛋白表達技術現已經廣泛應用于生物學各個具體領域，特別是蛋白的體內功能研究和蛋白質的大規模生產都需要應用重組蛋白表達載體。pCAMBIA的系列載體要么不含有蛋白融合標簽，必須要制備研究的蛋白自身的特異性抗體，費時費力，不利于快速地研究蛋白功能；要么含有較大的蛋白融合標簽(例如GFP和GUS等)，而這些大的蛋白融合標簽經常會對目標蛋白自身的功能發生干擾，因此也不利于準確地研究蛋白的功能。所以，本領域技術人員亟待要解決的技術問題是如何構建出含有FLAG融合蛋白標簽的pCAMBIA載體。

發明內容

為了解決現有技術中pCAMBIA載體沒有和FLAG這種小的蛋白融合標簽融合的問題，本發明提供了一種含有FLAG蛋白融合標簽的植物表達質粒載體及其載體的構建方法，實現的目的為，能夠得到一種含有FLAG蛋白這種小蛋白的融合標簽的植物表達質粒載體，進而幫助使用者快速的研究蛋白功能，并且不會對目標蛋白自身的功能發生干擾，保證能夠準確地研究蛋白的功能。

為了實現上述目的，本發明提供的技術方案為，本發明公開的一種含有FLAG蛋白融合標簽的植物表達質粒載體，該載體為在植物表達質粒載體的C端含有FLAG蛋白融合標簽的植物表達質粒載體。

具體地，該載體包含有三段編碼FLAG蛋白標簽Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys的基因片段，所述三個FLAG蛋白的核苷酸序列分別如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQID No.3所示。

具體地，該載體的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

優選的，本發明還公開了構建上述所述質粒載體的方法，包括如下步驟：

(1)以pCAMBIA1302為出發質粒，采用SpeI和Eco065I酶切該質粒，通過凝膠電泳切膠回收9802bp的片段；

(2)全序列合成包含編碼3個FLAG蛋白的核苷酸序列，全序列合成包含編碼3個FLAG蛋白的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；