[發明專利]一種脊尾白蝦EC12 SNP標記的檢測方法

有效

• 申請號: 201810797467.1
• 申請日: 2018-07-19
• 公開（公告）號: CN108913784B
• 公開（公告）日: 2021-11-26
• 發明（設計）人: 李吉濤;李健;劉萍;陳萍
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院黃海水產研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 青島致嘉知識產權代理事務所(普通合伙) 37236
• 代理人: 桑丹

1.脊尾白蝦EC12位點SNP標記的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

首先提取不同地理群或脊尾白蝦群內個體的基因組DNA備用；

利用脊尾白蝦轉錄組文庫中的含有EC12 SNP標記的核心序列，在其序列兩端設計特異性引物；所述EC12 SNP標記的核心序列如SEQ ID NO.3所示；所述特異性引物序列分別為：正向引物序列為SEQ ID NO.1所示，反向引物序列為SEQ ID NO.2所示；

使用該引物對脊尾白蝦不同地理群或脊尾白蝦群內個體的基因組DNA進行PCR擴增，對PCR產物進行檢測；PCR擴增體系為：脊尾白蝦基因組DNA 100ng；10X PCR Buffer，2.0μL；25mmol/L Mg²⁺，2μL；Taq酶，1U；dNTP，2μL；正反引物各2μL；加滅菌水至20μL；PCR反應程序為：94℃變性5min；94℃ 40sec，55℃ 40sec，72℃ 40sec，35個循環；72℃延伸10min，4℃保存；

利用PCR產物進行限制性內切酶酶切反應，根據出現的條帶進行分析，確定每個個體的基因型，并獲得脊尾白蝦的遺傳多態性圖譜；PCR產物的檢測和酶切為：將PCR產物在1％的瓊脂糖凝膠進行電泳，160V恒電壓電泳20-30分鐘進行檢測；PCR產物檢測合格后，利用限制性內切酶Hind III進行酶切反應，酶切反應體系20μL，包括PCR產物5μL，10X Buffer 2.0μL，Hind III內切酶1μL，加ddH₂O至20μL；酶切反應溫度37℃保溫1小時，然后將酶切產物進行瓊脂糖凝膠電泳，160V恒電壓電泳25分鐘進行檢測，最后利用全自動凝膠成像儀進行拍照可得到脊尾白蝦在EC12 SNP位點的多態性圖譜。

2.脊尾白蝦EC12位點SNP標記遺傳多態性圖譜的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：

首先提取不同地理群或脊尾白蝦群內個體的基因組DNA備用；

利用脊尾白蝦轉錄組文庫中的含有EC12 SNP標記的核心序列，在其序列兩端設計特異性引物；

使用該引物對脊尾白蝦不同地理群或脊尾白蝦群內個體的基因組DNA進行PCR擴增，對PCR產物進行檢測；

利用PCR產物進行限制性內切酶酶切反應，根據出現的條帶進行分析，確定每個個體的基因型，并獲得脊尾白蝦的遺傳多態性圖譜；

所述特異性引物序列分別為：正向引物序列為SEQ ID NO.1所示，反向引物序列為SEQID NO.2所示。