[發明專利]一種法夫酵母細胞機械破壁的方法在審
| 申請號： | 201810795767.6 | 申請日： | 2018-07-19 |
| 公開（公告）號： | CN108865891A | 公開（公告）日： | 2018-11-23 |
| 發明（設計）人： | 李紀豐;石英杰;孫常明;華曉曼;蔣海燕;足立勝 | 申請（專利權）人： | 威海利達生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N1/06 | 分類號： | C12N1/06;C12R1/645 |
| 代理公司： | 北京志霖恒遠知識產權代理事務所(普通合伙) 11435 | 代理人： | 孟阿妮 |
| 地址： | 264200 山東*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 破壁 蒸餾水 沉淀 法夫酵母細胞 法夫酵母 機械破壁 往復泵 菌液 有機溶劑萃取 高壓均質機 細胞內容物 顯微鏡觀察 濃度稀釋 發酵液 前發酵 蝦青素 氨基酸 稱重 多肽 混勻 伸出 細胞 節約 保留 | ||
1.一種法夫酵母細胞機械破壁的方法，其特征在于：所述方法的整體步驟為：
步驟一，法夫酵母發酵液1-4L在5000-10000rpm下離心5-10min后棄掉上清液，保留沉淀；
步驟二，向沉淀中加入與步驟一中離心前發酵液相同體積的蒸餾水混勻，在5000-10000rpm下離心5-10min后棄掉上清液，保留沉淀；
步驟三，將離心后的沉淀進行稱重，稱重后加入蒸餾水將濃度稀釋至20-50％，充分混勻，調節pH 5-8；
步驟四，在壓力70-100Mpa、往復泵單次流量5-8mL、往復泵伸出速度20-5次/min的條件下，將稀釋后菌液通過高壓均質機進行機械破壁2-5次；
步驟五，顯微鏡觀察菌液中革蘭氏染色后的細胞破壁情況；若仍存在完整的細胞壁，重復步驟四，直至所有細胞均破壁完成；
步驟六，在5000-10000rpm下離心5-10min后棄掉上清液，向沉淀中添加100-1000mL的有機溶劑，對細胞內含物進行萃取。
2.根據權利要求1所述的法夫酵母細胞機械破壁的方法，其特征在于：所述革蘭氏染色方法為：涂片固定；草酸銨結晶紫染色1min；蒸餾水沖洗；碘液覆蓋1min；蒸餾水沖洗，吸水紙吸去水分；95％酒精脫色30s；番紅染色液染色10s，蒸餾水沖洗，干燥。
3.根據權利要求2所述的法夫酵母細胞機械破壁的方法，其特征在于：所述有機溶劑為大豆油、花生油、玉米油、菜籽油、葵花油、調和油、橄欖油、甘油、石油醚、丙酮、異丙醇、三氯甲烷、乙醇、甲醇中的一種或多種的組合。
4.根據權利要求3所述的法夫酵母細胞機械破壁的方法，其特征在于：所述方法適用于對無性型法夫酵母細胞以及有性型法夫酵母細胞進行機械破壁。
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