[發明專利]一種胃癌靶向重組免疫毒素的快速純化方法

在審

• 申請號: 201810794778.2
• 申請日: 2018-07-18
• 公開（公告）號: CN109021113A
• 公開（公告）日: 2018-12-18
• 發明（設計）人: 柳增善;李萌;王海波;胡盼;任洪林;盧士英;張嵩;馬學東
• 申請（專利權）人: 上海杵焱健康科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/18;C07K1/16
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司 22100
• 代理人: 魏征驥

1.一種胃癌靶向重組免疫毒素的快速純化方法，其特征在于，包括下列步驟：

(1)取IPTG誘導后重組菌體，300W，30min超聲破碎，離心取上清并加入終飽和度為40％的硫酸銨，充分混勻后離心收集沉淀；

(2)使用上樣緩沖液重懸步驟(1)中的蛋白沉淀，并在相同緩沖液中透析3h；

(3)取透析后蛋白溶液經蛋白純化系統，上樣到離子交換層析介質(Q SepharoseFast Flow)，后通過該純化系統以0-1mol/L氯化鈉緩沖液濃度梯度洗脫，收集0.2-0.9mol/L氯化鈉濃度下洗脫的蛋白溶液；

(4)將收集的蛋白溶液再次經蛋白純化系統，上樣到分子排阻層析介質(G-25)除鹽，其緩沖體系被置換為保存液，收集所有蛋白溶液；

(5)通過Milipore 10KD超濾管，低溫離心上述收集蛋白溶液，收集濾液。

2.根據權利要求1所述的一種胃癌靶向重組免疫毒素的快速純化方法，其特征在于，IPTG誘導后重組菌體的制備步驟如下：

取甘油保存的已構建完成表達菌株BL21(DE3)PLysS(pET-rG17PE38KDEL)通過接種環于LB固體培養基(50mg/L抗生素)上劃線接種活化，37℃培養過夜挑取單菌落接種于5mL液體LB培養基中，取過夜搖培的BL21(DE3)PLysS(pET-rG17PE38KDEL)菌液以1％的接菌量接種到1L LB液體培養基(kana+)中,180rpm/min,37℃搖培2h后加入0.5mM誘導劑IPTG，180rpm/min 16℃搖培16h，經SDS-PAGE電泳驗證，所表達蛋白65％以上為可溶狀態。

3.根據權利要求1所述的一種胃癌靶向重組免疫毒素的快速純化方法，其特征在于：步驟(1)離心條件是8000g，30min，4℃。

4.根據權利要求1所述的一種胃癌靶向重組免疫毒素的快速純化方法，其特征在于：步驟(2)中上樣緩沖液為20mM Tris-Hcl，pH7.0。

5.根據權利要求1所述的一種胃癌靶向重組免疫毒素的快速純化方法，其特征在于：步驟(4)中保存液為50mmol/L Na₃PO₄,100mmol/L NaCl,1mmol/L EDTA,pH 7.4。

6.根據權利要求1所述的一種胃癌靶向重組免疫毒素的快速純化方法，其特征在于：步驟(5)中低溫離心條件為5000g，30min，4℃。

7.根據權利要求1所述的一種胃癌靶向重組免疫毒素的快速純化方法，其特征在于：步驟(5)中經純化過程后得到的胃癌靶向重組免疫毒素rG17PE38KDEL的純度可達95％以上。