[發(fā)明專利]一種利用緊穗野生稻葉片為外植體獲得再生植株的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810790300.2 | 申請日： | 2018-07-18 |
| 公開（公告）號： | CN110393151B | 公開（公告）日： | 2022-06-03 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 王玲仙;張敦宇;陳玲;程在全;肖素勤;付堅;陳越;鐘巧芳;殷富有;柯學(xué);王波;羅紅梅;雷涌濤;曾黎瓊;蔣聰;吳金虎 | 申請（專利權(quán)）人： | 云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)與種質(zhì)資源研究所 |
| 主分類號： | A01H4/00 | 分類號： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 昆明知道專利事務(wù)所(特殊普通合伙企業(yè)) 53116 | 代理人： | 謝喬良;張玉 |
| 地址： | 650223 *** | 國省代碼： | 云南;53 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 利用 野生 葉片 外植體 獲得 再生 植株 方法 | ||
1.一種利用緊穗野生稻葉片為外植體獲得再生植株的方法，其特征在于，包括前處理、誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、分化培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和煉苗移栽步驟，具體包括：
A、前處理：選擇新長出的緊穗野生稻葉片，清洗后滅菌備用；
B、誘導(dǎo)培養(yǎng)：將前處理后的新葉片切成0.5~0.8cm接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，于溫度25~30℃下暗培養(yǎng)10~20天得到誘導(dǎo)愈傷組織；誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS 4~4.5g/L+2,4-D 6~8mg/L+瓊脂粉8~10g/L+蔗糖20~40g/L，pH 5.8~6.0；
C、增殖培養(yǎng)：將誘導(dǎo)愈傷組織切成0.3~0.6cm接入增殖培養(yǎng)基中，于溫度25~30℃暗培養(yǎng)20~30天得到增殖愈傷組織；增殖培養(yǎng)基為：MS 4~4.5g/L+2,4-D 4~6mg/L+瓊脂粉8~10g/L+蔗糖20~40g/L，pH 5.8~6.0；
D、分化培養(yǎng)：將增殖愈傷組織切成1.2~1.5cm接入分化培養(yǎng)基中，于溫度25~30℃、光照為1500~2500Lx下進(jìn)行弱光培養(yǎng)20~30天后，再換相同分化培養(yǎng)基一次，于溫度25~30℃、光照為1500~2500Lx下進(jìn)行弱光培養(yǎng)10~20天得到小苗；分化培養(yǎng)基為：MS 4~4.5g/L+6-BA 4~5mg/L+ZT 2~4mg/L+NAA 0.02~0.04mg/L+植物凝膠2.5~3g/L+蔗糖20~40g/L，pH 5.8~6.0；
E、壯苗培養(yǎng)：將小苗接入壯苗培養(yǎng)基中，于溫度25~30℃、光照為2500~3500Lx下進(jìn)行光照培養(yǎng)20~30天得到健壯無根苗；壯苗培養(yǎng)基為：MS 4~5g/L+6-BA 2~4mg/L+TDZ 2~4mg/L+NAA 0.02~0.04mg/L+植物凝膠2.5~3g/L+蔗糖20~40g/L，pH 5.8~6.0；
F、生根培養(yǎng)：將健壯無根苗接入生根培養(yǎng)基中，于溫度25~30℃、光照為3500~4500Lx下進(jìn)行光照培養(yǎng)10~20天得到生根苗；生根培養(yǎng)基為：MS 4~5g/L+NAA 0.4~0.6mg/L+植物凝膠2.5~3g/L+蔗糖10~20g/L，pH 5.8~6.0；
G、煉苗移栽：將生根苗的根部培養(yǎng)基沖洗干凈，加水淹沒根部，于溫度25~30℃、光照為1500~2500Lx下過渡培養(yǎng)2~4天，然后在加入腐殖土繼續(xù)培養(yǎng)8~12天至長出新根，即刻移栽大田中。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，A步驟中所述的清洗是將新葉片用自來水沖洗20~30min，再用蒸餾水沖洗2~4次。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，A步驟中所述的滅菌是用體積百分濃度8%的次氯酸鈉處理8~12min，倒掉次氯酸鈉，再加入體積百分濃度5%的次氯酸鈉處理5~7min，倒掉次氯酸鈉，無菌水洗6~7次，用無菌吸水紙吸干表面水分。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS 4.43g/L+2,4-D7mg/L+瓊脂粉9g/L+蔗糖30g/L，pH 5.8。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述增殖培養(yǎng)基為：MS 4.43g/L+2,4-D5mg/L+瓊脂粉9g/L+蔗糖30g/L，pH 5.8。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述分化培養(yǎng)基為：MS 4.43g/L+6-BA4.5mg/L+ZT 3mg/L+NAA 0.03mg/L+植物凝膠2.8g/L+蔗糖30g/L，pH 6.0。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述壯苗培養(yǎng)基為：MS 4.43g/L+6-BA3mg/L+TDZ 3mg/L+NAA 0.03mg/L+植物凝膠2.8g/L+蔗糖30g/L，pH 6.0。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述生根培養(yǎng)基為：MS 4.43g/L+NAA0.5mg/L+植物凝膠2.8g/L+蔗糖15g/L，pH 6.0。
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