[發明專利]一種利用緊穗野生稻葉片為外植體獲得再生植株的方法

有效

• 申請號: 201810790300.2
• 申請日: 2018-07-18
• 公開（公告）號: CN110393151B
• 公開（公告）日: 2022-06-03
• 發明（設計）人: 王玲仙;張敦宇;陳玲;程在全;肖素勤;付堅;陳越;鐘巧芳;殷富有;柯學;王波;羅紅梅;雷涌濤;曾黎瓊;蔣聰;吳金虎
• 申請（專利權）人: 云南省農業科學院生物技術與種質資源研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 昆明知道專利事務所(特殊普通合伙企業) 53116
• 代理人: 謝喬良;張玉

本發明公開了一種利用緊穗野生稻葉片為外植體獲得再生植株的方法，包括前處理、誘導培養、增殖培養、分化培養、壯苗培養、生根培養和煉苗移栽步驟。本發明利用緊穗野生稻植株葉片作為外植體，采用清水清洗，用體積百分濃度8%的次氯酸鈉處理8~12min，倒掉次氯酸鈉，再加入體積百分濃度5%的次氯酸鈉處理5~7min，倒掉次氯酸鈉，無菌水洗6~7次后，接入愈傷誘導培養基上進行愈傷誘導培養，愈傷增殖，增殖愈傷再接入分化培養基上進行分化培養，分化苗經過生根，煉苗最后移栽大田，在愈傷誘導、愈傷增殖、分化培養以及生根培養過程中運用不同植物激素組合和培養技術條件的變化，成功的利用緊穗野生稻植株葉鞘作為外植體誘導出愈傷組織并獲得再生植株。

技術領域

本發明屬于植物組織培養技術領域，具體涉及一種利用緊穗野生稻葉片為外植體獲得再生植株的方法。

背景技術

野生稻資源是水稻育種中獲得有利外源基因的一個重要來源。緊穗野生稻（Oryza eichingeri）原產于非洲，斯里南卡，具有CC染色體組，與栽培稻親緣關系較遠，并具有許多優良特性，如抗蟲、抗病、抗旱、植株高大、功能葉片耐衰老、良好生長優勢等。

目前，緊穗野生稻的繁殖手段主要是莖干扦插和分根移栽，以及種子繁殖，利用莖干扦插和分根移栽繁殖緊穗野生稻后代，繁殖過程繁瑣、繁殖率低、時間長；利用種子進行繁殖，種子落粒性強，種子品質較差，種子萌發率較低，這樣嚴重妨礙了緊穗野生稻的保存、保護和利用。為了更多、更好、更快地獲得緊穗野生稻后代，開發一種拓寬緊穗野生稻繁殖范圍的方法是非常必要的。

發明內容

本發明的目的在于提供一種利用緊穗野生稻葉片為外植體獲得再生植株的方法。

本發明的目的是這樣實現的，包括前處理、誘導培養、增殖培養、分化培養、壯苗培養、生根培養和煉苗移栽步驟，具體包括：

A、前處理：選擇新長出的緊穗野生稻葉片，清洗后滅菌備用；

B、誘導培養：將前處理后的新葉片切成0.5~0.8cm接入誘導培養基上，于溫度25~30℃下暗培養10~20天得到誘導愈傷組織；

C、增殖培養：將誘導愈傷組織切成0.3~0.6cm接入增殖培養基中，于溫度25~30℃暗培養20~30天得到增殖愈傷組織；

D、分化培養：將增殖愈傷組織切成1.2~1.5cm接入分化培養基中，于溫度25~30℃、光照為1500~2500Lx下進行弱光培養20~30天后，再換相同分化培養基一次，于溫度25~30℃、光照為1500~2500Lx下進行弱光培養10~20天得到小苗；

E、壯苗培養：將小苗接入壯苗培養基中，于溫度25~30℃、光照為2500~3500Lx下進行光照培養20~30天得到健壯無根苗；

F、生根培養：將健壯無根苗接入生根培養基中，于溫度25~30℃、光照為3500~4500Lx下進行光照培養10~20天得到生根苗；

G、煉苗移栽：將生根苗的根部培養基沖洗干凈，加水淹沒根部，于溫度25~30℃、光照為1500~2500Lx下過渡培養2~4天，然后在加入腐殖土繼續培養8~12天至長出新根，即刻移栽大田中；

其中，所述的誘導培養基為：MS 4~4.5g/L+2,4-D 6~8mg/L+瓊脂粉8~10g/L+蔗糖20~40g/L，pH5.8~6.0；

所述的增殖培養基為：MS4~4.5g/L+2,4-D 4~6mg/L+瓊脂粉8~10g/L+蔗糖20~40g/L，pH5.8~6.0；

所述的分化培養基為：MS4~4.5g/L+6-BA4~5mg/L+ZT2~4mg/L+NAA0.02~0.04mg/L+植物凝膠2.5~3g/L+蔗糖20~40g/L，pH5.8~6.0；