[發明專利]一種血液游離DNA的保護劑及真空采血管

在審

• 申請號: 201810789387.1
• 申請日: 2018-07-18
• 公開（公告）號: CN108823286A
• 公開（公告）日: 2018-11-16
• 發明（設計）人: 伍建;姬曉雯;馮越;郜玉杰
• 申請（專利權）人: 北京邁基諾基因科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806;C12M1/24
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;王春霞

本發明公開了一種血液游離DNA的保護劑及真空采血管。本發明血液游離DNA的保護劑為一種組合物，該組合物包括咪唑烷基脲、乙二胺四乙酸三鉀二水合物和甘氨酸。本發明用于血液中游離DNA檢測的真空采血管，它包括采血管和與之相匹配的塞子，所述采血管呈真空狀態；所述采血管內設有所述的血液游離DNA的保護劑。本發明保護劑能夠有效防止細胞中基因組DNA釋放到血漿中，保護血漿中游離DNA不被污染；能夠在常溫條件下使血液中游離DNA穩定儲存一周。

技術領域

本發明涉及一種血液游離DNA的保護劑及真空采血管，屬于生物檢測技術領域。

背景技術

隨著二代基因測序技術的快速發展，對于血液中游離DNA的早期篩查已經成為一種重要的檢測手段，它可以用于基于基因檢測技術的癌癥的早期篩查、診斷、監控等領域，也可用于無創傷性產前診斷。雖然健康人體的血漿中只有少量游離DNA，但血液循環中的游離DNA水平的增減與許多臨床疾病有關。無創產前診斷是通過對產婦血液中的胎兒游離DNA的檢測分析，判斷胎兒是否存在整個染色體或者大片段DNA變異等，進而對胎兒遺傳疾病做出診斷。但是，孕婦血漿中胎兒游離DNA的含量很少，僅占總游離DNA的5％～7％，血樣采集、保存、血漿分離方法不當都會導致母體有核細胞破裂釋放出的染色體DNA污染和細胞內高濃度的DNA酶降解，影響分析結果的準確性。

隨著液體活檢的興起，眾所周知，癌癥越早發現越容易治愈，因此液體活檢在臨床診斷中有著重要的意義。腫瘤細胞在進行分裂增值過程當中，會凋亡、死亡，也會主動向血液中分泌這種已經經歷過基因突變的DNA碎片，并且有研究發現血漿DNA與腫瘤細胞DNA具有一致性，這也成為了腫瘤早期診斷中重要的Biomarker。因此如何保存血液，使其最大程度的保持初始狀態也成為了人們關注的焦點。

目前市場上已有眾多品牌的血液保存管，其主要成分是EDTA或者肝素鋰或肝素鈉，其主要作用是收集全血，進行血漿分離。僅含有抗凝劑的采血管，對儲存和運輸條件的要求苛刻，血液樣本不易保存，且保存時間有限，不利于邊遠地區進行采樣并且也不能有效抑制RNase酶的活性，從而不能保護血漿中游離DNA的穩定性，導致腫瘤早期篩查或者胎兒的產前篩查和診斷的結果不準確。

發明內容

本發明的目的是提供一種血液游離DNA的保護劑及真空采血管，本發明保護劑能夠有效防止細胞中基因組DNA釋放到血漿中，保護血漿中游離DNA不被污染；能夠在常溫條件下使血液中游離DNA穩定儲存一周。

本發明提供的一種組合物，它包括防腐劑、乙二胺四乙酸鹽和緩沖溶劑；

所述防腐劑選自咪唑烷基脲、雙(羥甲基)咪唑烷基脲和重氮咪唑烷基脲中的至少一種；

所述乙二胺四乙酸鹽選自乙二胺四乙酸三鉀二水合物和/或二水合乙二胺四乙酸二鈉；

所述緩沖溶劑選自甘氨酸、Tris-HCl和氯化鈉中的至少一種。

本發明所述組合物具體可由所述咪唑烷基脲、所述乙二胺四乙酸三鉀二水合物和所述甘氨酸組成。

上述的組合物中，所述防腐劑、所述乙二胺四乙酸鹽和所述緩沖溶劑的質量比可為1～9.27：1：0.29～1。

上述的組合物中，所述防腐劑、所述乙二胺四乙酸鹽和所述緩沖溶劑的質量比可為4.94～6.17：1：0.46～0.58，具體可為5.20:1:0.48、5.53:1:0.52、5.86:1:0.55、6.17：1：0.58。

本發明中，所述咪唑烷基脲英文名稱為Imidazolidinyl urea，簡稱IDU，起到防腐劑的作用；在本發明保護劑中起到維持細胞穩定，防止細胞破裂釋放DNA，從而避免細胞外游離DNA濃度的增加；