[發明專利]一種高效表達利拉魯肽前體的重組工程菌及其應用有效
| 申請號: | 201810787109.2 | 申請日: | 2018-07-16 |
| 公開(公告)號: | CN110724187B | 公開(公告)日: | 2022-09-16 |
| 發明(設計)人: | 楊柏成;趙運星 | 申請(專利權)人: | 甘李藥業股份有限公司 |
| 主分類號: | C07K14/605 | 分類號: | C07K14/605;C12N15/16;C12N15/70;C12N1/21;C12P21/02;C12R1/19 |
| 代理公司: | 北京路浩知識產權代理有限公司 11002 | 代理人: | 王文君;陳征 |
| 地址: | 101102 北京市通州區中關村*** | 國省代碼: | 北京;11 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 高效 表達 利拉魯肽前體 重組 工程 及其 應用 | ||
1.利拉魯肽前體分子的編碼基因,其特征在于,其核苷酸序列如SEQ ID NO.10、SEQ IDNO.11、SEQ ID NO.12或SEQ ID NO.13所示。
2.含有權利要求1所述利拉魯肽前體分子的編碼基因的生物材料,所述生物材料為表達載體、表達盒、重組菌或轉基因細胞系。
3.權利要求1所述利拉魯肽前體分子的編碼基因或權利要求2所述生物材料在利拉魯肽的制備中的應用。
4.一種重組工程菌,其特征在于,所述重組工程菌通過以下方法構建得到:將權利要求1所述利拉魯肽前體分子的編碼基因連接到表達載體上,構建得到重組表達載體,再將重組表達載體轉化入大腸桿菌中。
5.如權利要求4所述的重組工程菌,其特征在于,所述表達載體選自pET系列載體、pASK系列載體或pBad系列載體。
6.含有權利要求4或5所述的重組工程菌的菌劑。
7.權利要求4或5所述重組工程菌或權利要求6所述菌劑在利拉魯肽的制備中的應用。
8.一種制備利拉魯肽前體的制備方法,其特征在于,所述方法包括以下步驟:
(1)種子活化:挑取權利要求4或5所述重組工程菌接種至培養基;
(2)液體種子活化:從步驟(1)的培養基上挑取菌苔至液體種子培養基中,活化培養;
(3)發酵培養:步驟(2)的液體種子接種至液體發酵培養基,培養;
(4)收集菌體,破碎,洗滌包涵體;
(5)變性復性,酶切純化。
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