[發明專利]一種羥基化三氯卡班的制備方法與應用

有效

• 申請號: 201810785477.3
• 申請日: 2018-07-17
• 公開（公告）號: CN109053497B
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發明（設計）人: 蔡宗葦;張宏娜
• 申請（專利權）人: 香港浸會大學深圳研究院
• 主分類號: C07C277/08
• 分類號: C07C277/08;C07C279/18;G01N30/02
• 代理公司: 深圳市君勝知識產權代理事務所(普通合伙) 44268
• 代理人: 王永文;劉文求

1.一種羥基化三氯卡班的制備方法，其特征在于，包括：

步驟A、將摩爾比為1:1的氨基-氯代苯酚與氯代苯異氰酸酯溶于有機溶劑中，在反應溫度為55℃下反應24h，得到反應混合液；

步驟B、將所述反應混合液倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次，有機相用硫酸鎂干燥，將溶劑減壓蒸干后，得到羥基化三氯卡班粗產物；

步驟C、向所述羥基化三氯卡班粗產物中加10mL乙酸乙酯和4mL硅膠粉進行復溶并蒸干溶劑，接著通過硅膠柱色譜法用洗脫劑對所述羥基化三氯卡班粗產物進行提純，減壓旋蒸并真空干燥后得到羥基化三氯卡班；

步驟C中，所述硅膠粉的規格為100-200目；通過硅膠柱色譜法進行提純時，采用的硅膠柱的內徑為26mm，所述硅膠柱的填充高度為100mm；所述洗脫劑為體積比為20-30:1的二氯甲烷和乙酸乙酯的混合溶劑；

步驟A中，所述氨基-氯代苯酚為2-氨-5-氯苯酚，所述氯代苯異氰酸酯為3,4-二氯苯異氰酸酯，反應得到的羥基化三氯卡班的結構式如下所示：

或者，所述氨基-氯代苯酚為2-氯-5-氨苯酚，所述氯代苯異氰酸酯為3,4-二氯苯異氰酸酯，反應得到的羥基化三氯卡班的結構式如下所示：

或者，所述氨基-氯代苯酚為2-氨-4,5-二氯苯酚，所述氯代苯異氰酸酯為4-氯苯異氰酸酯，反應得到的羥基化三氯卡班的結構式如下所示：

所述有機溶劑為N,N-二甲基甲酰胺；

所述羥基化三氯卡班用于對生物樣品中羥基化三氯卡班進行定性和定量檢測。

2.一種生物樣品中羥基化三氯卡班的檢測方法，其特征在于，以生物樣品中的2′-OH-TCC、3'-OH-TCC、6-OH-TCC為目標化合物；以羥基化三氯卡班作為標準品，用超高效液相色譜-三重四級桿串聯質譜儀對待測生物樣品中的目標化合物進行檢測；

作為標準品的所述羥基化三氯卡班的制備方法包括：

步驟A、將摩爾比為1:1的氨基-氯代苯酚與氯代苯異氰酸酯溶于有機溶劑中，在反應溫度為55℃下反應24h，得到反應混合液；

步驟B、將所述反應混合液倒入水中，用乙酸乙酯萃取，有機相用硫酸鎂干燥，將溶劑減壓蒸干后，得到羥基化三氯卡班粗產物；

步驟C、向所述羥基化三氯卡班粗產物中加乙酸乙酯和硅膠粉進行復溶并蒸干溶劑，接著通過硅膠柱色譜法用洗脫劑對所述羥基化三氯卡班粗產物進行提純，減壓旋蒸并真空干燥后得到羥基化三氯卡班；

步驟C中，所述硅膠粉的規格為100-200目，復溶時所述硅膠粉的添加量為原料氨基-氯代苯酚與氯代苯異氰酸酯質量之和的1.5-2.5倍；通過硅膠柱色譜法進行提純時，采用的硅膠柱的內徑為26mm，所述硅膠柱的填充高度為100mm；所述洗脫劑為體積比為20-30:1的二氯甲烷和乙酸乙酯的混合溶劑；

步驟A中，所述氨基-氯代苯酚為2-氨-5-氯苯酚，所述氯代苯異氰酸酯為3,4-二氯苯異氰酸酯，反應得到的羥基化三氯卡班的結構式如下所示：

或者，所述氨基-氯代苯酚為2-氯-5-氨苯酚，所述氯代苯異氰酸酯為3,4-二氯苯異氰酸酯，反應得到的羥基化三氯卡班的結構式如下所示：

或者，所述氨基-氯代苯酚為2-氨-4,5-二氯苯酚，所述氯代苯異氰酸酯為4-氯苯異氰酸酯，反應得到的羥基化三氯卡班的結構式如下所示：

以4.55min為作為標準品的2′-OH-TCC和6-OH-TCC的色譜保留時間，以4.12min為作為標準品的3'-OH-TCC的色譜保留時間；以m/z328.9→142.0和m/z328.9→168.0為作為標準品的2′-OH-TCC和3′-OH-TCC的監測離子對，以m/z328.9→176.0和m/z328.9→202.0為作為標準品的6-OH-TCC的監測離子對；對生物樣品中羥基化三氯卡班進行定性檢測；

以m/z328.9→168.0為作為標準品的2′-OH-TCC和3′-OH-TCC的定量用監測離子對，以m/z328.9→202.0為作為標準品的6-OH-TCC的定量用監測離子對；以色譜峰的峰面積對生物樣品中羥基化三氯卡班進行定量檢測；以標準曲線法計算獲得定量檢測結果；

所述檢測的色譜條件包括：采用ACQUITYUPLCBEHC18色譜柱，規格為1.7μm，100mm×2.1mm，Waters；流動相包括乙腈和2mM的醋酸銨水溶液，流動相的流速為0.3mL/min；在柱溫為35℃，進樣量為10μL的條件下，根據待測生物樣品中各組分的色譜保留時間不同通過梯度洗脫程序將待測生物樣品中各組分進行色譜分離；

所述檢測的質譜條件包括：噴霧電壓為2600V，離子傳輸管溫度為350℃，噴霧器溫度為300℃，在電噴霧負離子化模式下將色譜分離后的各組分進行質譜裂解，通過多反應監測模式對目標化合物的監測離子對進行掃描分析，并與平行操作的羥基化三氯卡班標準品相比較，即可確定生物樣品中的目標化合物及其含量；

所述梯度洗脫程序為：0-1min，所述流動相為體積比為2:8的乙腈和2mM的醋酸銨水溶液的混合物，流動相的流速為0.3mL/min；2-5.5min，所述流動相為體積比為8:2的乙腈和2mM的醋酸銨水溶液的混合物，流動相的流速為0.3mL/min；6-8min，所述流動相為體積比為8:2的乙腈和2mM的醋酸銨水溶液的混合物，流動相的流速為0.3mL/min。