[發(fā)明專利]兩種異喹啉類化合物及其制備方法和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810781614.6
• 申請(qǐng)日: 2018-07-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108997334A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-12-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃勝雄;向文勝;楊靜;紀(jì)旭;李潔;郭曉為
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所
• 主分類號(hào): C07D471/04
• 分類號(hào): C07D471/04;A61K31/437;C12P17/10;A61P1/16;A61P3/06;C12R1/465
• 代理公司: 昆明協(xié)立知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 53108
• 代理人: 旃習(xí)涵

1.如下結(jié)構(gòu)式所示的異喹啉類化合物1和2，

2.藥物組合物，其中含有治療有效量的權(quán)利要求1所述的的異喹啉類化合物1和/或2，和至少一種藥學(xué)上可接受的載體。

3.權(quán)利要求1所述的異喹啉類化合物1和2的制備方法，其特征在于；該方法以Streptomyces sp.HE-271為發(fā)酵菌株，經(jīng)發(fā)酵分離純化得到產(chǎn)物，發(fā)酵前對(duì)菌株進(jìn)行斜面培養(yǎng)、種子培養(yǎng)。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的異喹啉類化合物1和2的制備方法，其特征在于：所述的發(fā)酵培養(yǎng)基組成為：棉籽餅粉20g/L，玉米淀粉30g/L，麥芽糊精30g/L，葡萄糖10g/L，硫酸鎂1g/L，酵母提取粉5g/L，CaCO₃2g/L，使用去離子水配制，于121℃下滅菌30min，將種子液以5％V/V的移種量接入發(fā)酵搖瓶中，發(fā)酵搖瓶裝液量為50ml/250ml三角燒瓶，于30℃，200rpm旋轉(zhuǎn)式搖床上培養(yǎng)7d；

所述的斜面培養(yǎng)基組成為：斜面培養(yǎng)：培養(yǎng)基組成：大豆粉20g/L，甘露醇20g/L，瓊脂粉20g/L，pH7.0～7.2，使用去離子水配制和定容，于121℃下滅菌30min，接菌后置于30℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)3d；

所述的種子培養(yǎng)基組成為：胰蛋白胨17g/L，植物蛋白胨3g/L,氯化鈉5g/L,磷酸氫二鉀2.5g/L,葡萄糖2.5g/L，pH7.0～7.2，使用去離子水配制，于121℃下滅菌30min，將成熟平板上的孢子，用滅菌后的接種竹簽挖塊接種于種子培養(yǎng)搖瓶中，種子搖瓶裝液量50ml/250ml，于30℃，200rpm旋轉(zhuǎn)式搖床上培養(yǎng)72h。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的異喹啉類化合物1和2的制備方法，其特征在于所述的分離純化的方法為：發(fā)酵液用離心機(jī)在4000rpm下離心，上清液用乙酸乙酯進(jìn)行萃取5-6次，濃縮粗提物后進(jìn)行硅膠柱層析、C-18柱層析，得化合物。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的異喹啉類化合物1和2的制備方法，其特征在于：所述硅膠柱層析用到的填料是200～300目的硅膠，流動(dòng)相為體積比石油醚:乙酸乙酯＝100:0-0:100進(jìn)行梯度洗脫，流速為50-100ml/min，收集洗脫液，薄層層析檢測(cè)合并相同組分。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的異喹啉類化合物1和2的制備方法，其特征在于：所述C-18柱層析，使用C-18反相填料，并且使用的溶劑為體積分?jǐn)?shù)24％乙腈水溶液，進(jìn)行等度洗脫，流速為3.0mL/min。

8.權(quán)利要求1所述的異喹啉類化合物1和2的制備方法，其特征在于：該方法包括下述步驟：

(1)斜面培養(yǎng)：培養(yǎng)基組成：大豆粉20g/L，甘露醇20g/L，瓊脂粉20g/L，pH7.0～7.2，使用去離子水配制和定容，于121℃下滅菌30min。接菌后置于30℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)5d；

(2)種子培養(yǎng)：種子培養(yǎng)基組成：胰蛋白胨17g/L，植物蛋白胨3g/L,氯化鈉5g/L,磷酸氫二鉀2.5g/L,葡萄糖2.5g/L，pH7.0～7.2，使用去離子水配制，于121℃下滅菌30min。將成熟平板上的孢子，用滅菌后的接種竹簽挖塊接種于種子培養(yǎng)搖瓶中，種子搖瓶裝液量50ml/250ml，于30℃，200rpm旋轉(zhuǎn)式搖床上培養(yǎng)72h；

(3)發(fā)酵：發(fā)酵培養(yǎng)基組成：棉籽餅粉20g/L，玉米淀粉30g/L，葡萄糖10g/L，MgSO₄1g/L，酵母提取粉5g/L，PH 7.2再加CaCO₃2g/L，使用去離子水配制，于121℃下滅菌30min，將種子液以5％(V/V)的移種量接入發(fā)酵搖瓶中，發(fā)酵搖瓶裝液量為250ml三角燒瓶，于30℃，200rpm旋轉(zhuǎn)式搖床上培養(yǎng)7d；

(4)化合物分離：20L發(fā)酵液經(jīng)離心機(jī)4000rpm后得到上清液，上清液用用乙酸乙酯萃取，得到粗提物，粗提物過(guò)硅膠，得到10個(gè)組分，經(jīng)HPLC分析發(fā)現(xiàn)，主要成分主要集中在100％乙酸乙酯，用C-18半制備柱HPLC分離得到異喹啉類化合物1和2。