[發(fā)明專利]人體尿液中雌激素及其代謝產(chǎn)物的檢測方法

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• 申請日: 2018-07-17
• 公開（公告）號: CN109100436A
• 公開（公告）日: 2018-12-28
• 發(fā)明（設計）人: 鄔智剛;朱文漓;葉尚宇
• 申請（專利權）人: 成都益康譜科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種人體尿液中雌激素及其代謝產(chǎn)物的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包括如下步驟：

1）將人體尿液與內標液混合后，對其依次進行酶水解、有機溶劑萃取和反相介質的固相萃取純化，氮氣吹干后進行化學衍生得到待測樣本；

2）將上述待測樣本通過液相色譜和質譜儀聯(lián)用檢測，同步對雌激素及其代謝產(chǎn)物進行定性和定量的批量檢測。

2.根據(jù)權利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述步驟中酶水解的時間為3-12小時、水解溫度為37-50°C、水解液與樣本的用量體積比為1:1-3:1。

3.根據(jù)權利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述步驟中萃取所用的有機溶劑包括乙酸乙酯、正己烷、二氯甲烷、三氯甲烷和叔丁基甲醚，優(yōu)選的有機萃取溶劑為乙酸乙酯。

4.根據(jù)權利要求1所述的檢測方法，所述步驟中反相介質固相萃取的洗脫溶劑為甲醇或丙酮。

5.根據(jù)權利要求1所述的檢測方法，所述步驟中化學衍生的試劑為丹酰氯或鄰苯二甲醛、苯甲酰氯、熒光胺、對酞內酰胺苯璜酰氯等衍生試劑中的一種；所述的化學衍生法反應時間為5-30分鐘，反應溫度為50-70°C。

6.根據(jù)權利要求1-5項任一項所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟具體包括以下步驟：

步驟1）稱取雌激素及其代謝產(chǎn)物標準品，用甲醇溶解得到不同濃度的標準液；

步驟2）稱取內標樣品定容為內標液，隨后加入步驟1）中的標準液，甲醇、丙酮或超純水中任一種溶劑定容后離心，取上清液作為待測標準液；

步驟3）將步驟2）中得到的待測標準液和權利要求1中得到的待測樣本通過液質聯(lián)用檢測，經(jīng)過標準曲線計算得到尿液中雌激素及其代謝產(chǎn)物的種類和含量。

7.根據(jù)權利要求6所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟3）中液質聯(lián)用檢測的液相色譜條件為：

色譜柱為鍵合相色譜柱，進樣量為5-50μL，流動相A為純水，流動相B為乙腈甲醇的混合溶液，乙腈與甲醇的質量比為（9-1）:（1-9）；流動相的流速為0.1-2.0mL/min；流動相的梯度（以體積百分比計）：

0-3min, A: 30-100%, B: 70-0%;

3.1-5min, A: 10-60%, B: 90-60%;

5.1-7min, A: 0-50%, B: 100-50%;

7.1-9min, A: 50-100%, B: 50-0%;

9.1min, A: 30-100%, B:70-0%。

8.根據(jù)權利要求7所述的檢測方法，其特征在于，所述鍵合相色譜柱為C18或C8等鍵合相色譜柱，規(guī)格為（50-150mm）×（1-4.6mm），粒徑為1.7-5μm。

9.根據(jù)權利要求6所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟3）中液質聯(lián)用檢測的質譜儀條件為：采用電噴霧（ESI）離子源，正離子MRM掃描方式，霧化氣流速為5-10L/min，氣簾氣流速為5-20L/min，離子源電壓為2000-4500V，離子源溫度為200-400°C。

10.根據(jù)權利要求1-7任一項所述的檢測方法，其特征在于，所述雌激素及其代謝產(chǎn)物包括人體尿液中雌激素及其代謝產(chǎn)物，采用多反應監(jiān)測的質譜掃描模式，目標物的離子對監(jiān)測如下：

E1(m/z 504.2—171.1); E2(m/z 506.2—171.1); 16α-OHE1(m/z 520.2—171.1);E3(m/z 522.0—171.1); 16-ketoE2(m/z 520.2-171.1); 2-MeOE1(m/z 534.2—171.1); 3-MeOE1(m/z 534.2—171.1); 4-MeOE1(m/z 534.2—171.1); 2-MeOE2(m/z 536.2—171.1); 4-MeOE2(m/z 536.2—171.1); 2-OHE1(m/z 753.3—170.1); 4-OHE1(m/z753.3—170.1); 2-OHE2(m/z 755.3—170.1); 4-OHE2(m/z 755.3—170.1); TanshinoneIIA(m/z 295.2—277.2)。