[發明專利]一種治療阿爾茨海默癥的血漿蛋白分離物及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201810779486.1
• 申請日: 2018-07-16
• 公開（公告）號: CN110724176B
• 公開（公告）日: 2021-10-26
• 發明（設計）人: 栗琳;崔雅軒;江振作;陳玥;管書麗;石浩威;丁亮
• 申請（專利權）人: 北京豪思生物科技有限公司
• 主分類號: C07K1/36
• 分類號: C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;A61K38/41;A61P25/28
• 代理公司: 北京五洲洋和知識產權代理事務所(普通合伙) 11387
• 代理人: 劉春成;榮紅穎

1.一種血漿蛋白分離物在制備改善或/和治療阿爾茨海默癥的藥物中的應用，其特征在于：所述血漿蛋白分離物包括：α、β球蛋白，銅藍蛋白，運鐵蛋白，結合珠蛋白以及白蛋白；

所述血漿蛋白分離物的制備方法依次包括：從血液中分離血漿步驟，對血漿進行冷沉淀去除步驟，對所述冷沉淀去除步驟得到的上清液進行第一次低溫乙醇沉淀的步驟，對所述第一次低溫乙醇沉淀步驟得到的上清液進行第二次低溫乙醇沉淀的步驟，對所述第二次低溫乙醇沉淀步驟得到的上清液進行第三次低溫乙醇沉淀的步驟，對所述第三次低溫乙醇沉淀步驟得到的上清液進行第四次低溫乙醇沉淀的步驟，取所述第四次低溫乙醇沉淀后得到的沉淀物作為所述血漿蛋白分離物；

所述第一次低溫乙醇沉淀步驟中，向所述冷沉淀去除步驟得到的上清液中加入乙醇溶液、pH調節劑，形成第一次低溫乙醇沉淀體系，在所述第一次低溫乙醇沉淀體系中，乙醇體積百分含量為5-10％，溫度為0至-5℃，蛋白濃度為3-10g/dL，離子強度為0.10-0.20mol/kg，pH值為7.1-7.3；然后將該體系于0至-5℃條件下攪拌0.5-2h，隨后進行分離處理，得到第一分離組分沉淀物和第一分離組分上清液；

所述第二次低溫乙醇沉淀步驟中，向所述第一分離組分上清液中加入乙醇溶液、pH調節劑，形成第二次低溫乙醇沉淀體系，在所述第二次低溫乙醇沉淀體系中，乙醇體積百分含量為22-28％，溫度為0至-10℃，蛋白濃度為1-5g/dL，離子強度為0.05-0.20mol/kg，pH值為6.7-7.0；再將該體系于0至-10℃條件下攪拌3-8h，隨后進行分離處理，得到第二分離組分沉淀物和第二分離組分上清液；

所述第三次低溫乙醇沉淀步驟中，向所述第二分離組分上清液中加入乙醇溶液、pH調節劑，形成第三次低溫乙醇沉淀體系，在所述第三次低溫乙醇沉淀體系中，乙醇體積百分含量為15-20％，溫度為0至-10℃，蛋白濃度為1.0-2.0g/dL，離子強度為0.05-0.20mol/kg，pH值為5.0-5.4；再將該體系于0至-10℃條件下攪拌0.5-2.0h，靜置大于等于6h，隨后進行分離處理，得到第三分離組分沉淀物和第三分離組分上清液；

所述第四次低溫乙醇沉淀步驟中，向所述第三分離組分上清液中加入乙醇溶液、pH調節劑，形成第四次低溫乙醇沉淀體系，在所述第四次低溫乙醇沉淀體系中，體系的乙醇體積百分含量為35-45％，溫度為0至-10℃，蛋白濃度為0.05-2.0g/dL，離子強度為0.05-0.20mol/kg，pH值為5.7-6.0；再將該體系于0至-10℃攪拌0.3-1h，隨后進行分離處理，得到第四分離組分沉淀物和第四分離組分上清液。

2.根據權利要求1所述應用，其特征在于：

所述制備方法還包括：親和層析法去除所述血漿蛋白分離物中IgM的步驟和除菌步驟。

3.根據權利要求2所述應用，其特征在于：

所述親和層析法去除所述血漿蛋白分離物中IgM步驟中，親和層析處理采用的親和層析預裝柱的填料為2-巰基吡啶連接瓊脂糖。

4.根據權利要求2所述應用，其特征在于：

所述親和層析處理的步驟包括：

利用1-10倍柱體積的結合液平衡層析柱；

再將所述血漿蛋白分離物上樣；

再利用10-20倍柱體積的結合液洗出蛋白組分并檢測，得到去除IgM的所述血漿蛋白分離物。

5.根據權利要求4所述應用，其特征在于：

所述親和層析處理的步驟包括：

利用5倍柱體積的結合液平衡層析柱；

再將所述血漿蛋白分離物上樣；

再利用15倍柱體積的結合液洗出蛋白組分并檢測，得到去除IgM的所述血漿蛋白分離物。

6.根據權利要求2所述應用，其特征在于：

所述除菌步驟中，將去除IgM的所述血漿蛋白分離物過濾除菌，得到無菌的所述血漿蛋白分離物。

7.根據權利要求6所述應用，其特征在于：

所述過濾除菌的濾膜為0.22μm低蛋白吸附的PVDF膜，壓力為不超過10bar。