[發(fā)明專利]基于免疫磁珠標(biāo)記細(xì)胞的分級篩選方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810776729.6
• 申請日: 2018-07-14
• 公開（公告）號: CN108977404B
• 公開（公告）日: 2022-01-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 溫良恭;王麟;白中揚(yáng)
• 申請（專利權(quán)）人: 北京航空航天大學(xué)青島研究院
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00;C12N13/00;C12M1/00;C12M1/42
• 代理公司: 青島中天匯智知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37241
• 代理人: 劉曉

本發(fā)明提出一種基于免疫磁珠標(biāo)記細(xì)胞的分級篩選方法，包括若干級級聯(lián)的細(xì)胞篩選裝置，所述細(xì)胞篩選裝置的主體結(jié)構(gòu)被一層細(xì)胞篩分割成上層、下層腔體；通過硅膠管彼此連接,分級篩選方法包括如下步驟：S1.注入樣本；S2.沖洗免疫磁珠；S3.施加磁場；S4.沖洗其他細(xì)胞；S5.收集目標(biāo)細(xì)胞；重復(fù)步驟S2?S5，直到篩選出所有的目標(biāo)細(xì)胞，且目標(biāo)細(xì)胞將在不同級的細(xì)胞篩中篩選出來。本發(fā)明使用物理方式實(shí)現(xiàn)細(xì)胞篩選，能夠在同一個篩選裝置中，通過多次分級篩選將多種目標(biāo)細(xì)胞篩選出來，從而可以實(shí)現(xiàn)多種類型腫瘤細(xì)胞的同時診斷并提供準(zhǔn)確的檢測結(jié)果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于細(xì)胞分選技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于免疫磁珠標(biāo)記細(xì)胞的分級篩選方法。

背景技術(shù)

免疫磁珠在分子及細(xì)胞生物學(xué)方面已得到了廣泛應(yīng)用，包括核酸提取、特定蛋白質(zhì)與細(xì)胞的分選和富集等。現(xiàn)有基于免疫磁珠的細(xì)胞篩選技術(shù)直接通過磁力對磁珠進(jìn)行吸引，導(dǎo)致其對于與細(xì)胞結(jié)合的免疫磁珠和未結(jié)合的免疫磁珠沒有區(qū)分能力，在對磁珠進(jìn)行表面增強(qiáng)拉曼、雜散磁場測量等進(jìn)一步定性/定量檢測時無法除去由未結(jié)合的磁珠引起的噪聲信號，限制了免疫磁珠的進(jìn)一步應(yīng)用。

在實(shí)驗(yàn)室研究中，國際頂尖研究單位已通過在磁傳感器上表面制備特異性抗體的方式，與目標(biāo)細(xì)胞表面抗原結(jié)合，從而將目標(biāo)細(xì)胞成功捕獲在磁傳感器上方。再通過流體沖洗，就可以實(shí)現(xiàn)磁標(biāo)記細(xì)胞的篩選。

但是，現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)室磁傳感器的檢測方案中，依靠目標(biāo)細(xì)胞表面抗原和傳感器上方抗體的結(jié)合來實(shí)現(xiàn)目標(biāo)細(xì)胞的捕獲，并依靠流體沖刷來除去未結(jié)合的磁珠。該方案可以除去其它細(xì)胞與未結(jié)合的磁珠，但難以保證微量目標(biāo)細(xì)胞被成功捕獲。并且，這一方案使用了化學(xué)結(jié)合的方式，對循環(huán)腫瘤細(xì)胞等極微量的細(xì)胞難以保證成功捕獲，這樣就會在診斷中引起誤診。另外，這種通過抗體-抗原結(jié)合捕獲目標(biāo)細(xì)胞的方法需要人工參與，而且必須需要專業(yè)的技術(shù)人員才能夠完成，不利于集成，無法滿足大數(shù)據(jù)時代的信息化需求。

另外，采用免疫磁珠對目標(biāo)細(xì)胞上特有的抗原或受體進(jìn)行標(biāo)記，這種方法只能分選出一種目標(biāo)細(xì)胞。但是在實(shí)際應(yīng)用中，例如對全血樣品進(jìn)行腫瘤細(xì)胞檢測時，只分離出一種腫瘤細(xì)胞，但是卻不能確認(rèn)全血樣品中是否還含有其他種類的腫瘤細(xì)胞，無法為腫瘤細(xì)胞的檢測提供全面準(zhǔn)確的結(jié)果。雖然，不同的腫瘤細(xì)胞上可能存在相同的抗原或受體，用免疫磁珠標(biāo)記后可以一次分選出多種腫瘤細(xì)胞，但是進(jìn)一步確定腫瘤細(xì)胞種類的問題卻得不到解決，無法為癌癥診斷提供準(zhǔn)確的結(jié)果。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種基于免疫磁珠標(biāo)記細(xì)胞的分級篩選方法，該方法采用物理的方式實(shí)現(xiàn)細(xì)胞篩選，能夠極大的提高目標(biāo)細(xì)胞的捕獲率，而且能夠在一次篩選過程中，通過分級篩選將多種目標(biāo)細(xì)胞均篩選出來。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種基于免疫磁珠標(biāo)記細(xì)胞的分級篩選方法，包括若干級級聯(lián)的細(xì)胞篩選裝置，所述細(xì)胞篩選裝置的主體結(jié)構(gòu)被一層細(xì)胞篩分割成上層、下層腔體；通過硅膠管彼此連接,待檢測樣品中包含有N種目標(biāo)細(xì)胞，N種目標(biāo)細(xì)胞之間都攜帶與其他細(xì)胞所不同的特有的表面受體為x’，與表面受體x’配對的抗體為x，每級細(xì)胞篩選裝置內(nèi)充滿了修飾有x抗體的單一免疫磁珠的懸濁液，其中N大于等于2；所述分級篩選方法包括如下步驟，

S1.注入樣本，將檢測樣品從進(jìn)樣口輸入到第一級的細(xì)胞篩選裝置的腔體內(nèi)，關(guān)閉兩側(cè)閥門，使細(xì)胞與腔體內(nèi)的免疫磁珠充分的結(jié)合；

S2.沖洗免疫磁珠，待結(jié)合一定時間段后，對細(xì)胞篩選裝置施加縱向水流，由于免疫磁珠尺寸遠(yuǎn)小于篩孔，免疫磁珠將會被沖入到下層腔體，與免疫磁珠結(jié)合的目標(biāo)細(xì)胞和其他細(xì)胞由于尺寸遠(yuǎn)大于篩孔，將留在上層腔體；

S3.施加磁場：在腔體周圍加入縱向脈沖磁場，與免疫磁珠結(jié)合的目標(biāo)細(xì)胞將吸附到細(xì)胞篩表面，其他細(xì)胞的懸濁液將仍在上層腔體作自由運(yùn)動；

S4.沖洗其他細(xì)胞：打開與下一級腔體連接的閥門，從進(jìn)樣口通入橫向水流，將在上層腔體的其他細(xì)胞沖入到下一級的上層腔體，其中充滿著另外一種特異性極強(qiáng)的免疫磁珠懸濁液；