[發(fā)明專利]基于免疫磁珠標(biāo)記細(xì)胞的分級篩選方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810776729.6
• 申請日: 2018-07-14
• 公開（公告）號: CN108977404B
• 公開（公告）日: 2022-01-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 溫良恭;王麟;白中揚(yáng)
• 申請（專利權(quán)）人: 北京航空航天大學(xué)青島研究院
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00;C12N13/00;C12M1/00;C12M1/42
• 代理公司: 青島中天匯智知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37241
• 代理人: 劉曉

1.基于免疫磁珠標(biāo)記細(xì)胞的分級篩選方法，其特征在于，包括若干級級聯(lián)的細(xì)胞篩選裝置，所述細(xì)胞篩選裝置的主體結(jié)構(gòu)被一層細(xì)胞篩分割成上層、下層腔體；上層腔體通過硅膠管彼此連接，待檢測樣品中包含有N種目標(biāo)細(xì)胞，N種目標(biāo)細(xì)胞之間都攜帶與其他細(xì)胞所不同的特有的表面受體為x’，與表面受體x’配對的抗體為x，每級細(xì)胞篩選裝置內(nèi)充滿了修飾有x抗體的單一免疫磁珠的懸濁液，其中N大于等于2；所述分級篩選方法包括如下步驟，

S1.注入樣本，將檢測樣品從進(jìn)樣口輸入到第一級的細(xì)胞篩選裝置的腔體內(nèi)，關(guān)閉兩側(cè)閥門，使細(xì)胞與腔體內(nèi)的免疫磁珠充分的結(jié)合；

S2.沖洗免疫磁珠，待結(jié)合一定時間段后，對細(xì)胞篩選裝置施加縱向水流，由于免疫磁珠尺寸遠(yuǎn)小于篩孔，免疫磁珠將會被沖入到下層腔體，與免疫磁珠結(jié)合的目標(biāo)細(xì)胞和其他細(xì)胞由于尺寸遠(yuǎn)大于篩孔，將留在上層腔體；

S3.施加磁場：在腔體周圍加入縱向脈沖磁場，與免疫磁珠結(jié)合的目標(biāo)細(xì)胞將吸附到細(xì)胞篩表面，其他細(xì)胞仍在上層腔體作自由運(yùn)動；

S4.沖洗其他細(xì)胞：打開與下一級腔體連接的閥門，從進(jìn)樣口通入橫向水流，將在上層腔體的其他細(xì)胞沖入到下一級的上層腔體，其中充滿著另外一種特異性極強(qiáng)的免疫磁珠懸濁液；

S5.收集目標(biāo)細(xì)胞：從下層腔體的下入口加入縱向水流，并撤掉縱向脈沖磁場，此時目標(biāo)細(xì)胞將脫離細(xì)胞篩表面順著水流反向向上運(yùn)動，從上腔體的上出口收集到目標(biāo)細(xì)胞；

重復(fù)步驟S2-S5，直到篩選出所有的目標(biāo)細(xì)胞，且目標(biāo)細(xì)胞將在不同級的細(xì)胞篩中篩選出來。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于免疫磁珠標(biāo)記細(xì)胞的分級篩選方法，其特征在于，根據(jù)每種目標(biāo)腫瘤細(xì)胞表面所攜帶的特有的表面受體上，標(biāo)記修飾有與該表面受體配對的抗體的免疫磁珠。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的基于免疫磁珠標(biāo)記細(xì)胞的分級篩選方法，其特征在于，所述縱向脈沖磁場由磁場線圈和控制線圈中通入電流的直流電源、軟磁體或者電磁體和控制其磁場發(fā)生的信號發(fā)生器產(chǎn)生。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的基于免疫磁珠標(biāo)記細(xì)胞的分級篩選方法，其特征在于，所述細(xì)胞篩結(jié)構(gòu)為在10*10mm² 硅基底上形成5*5mm² 的篩孔陣列，單個篩孔大小為5μm或8μm圓孔，或?yàn)?*15μm的方孔。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的基于免疫磁珠標(biāo)記細(xì)胞的分級篩選方法，其特征在于，所述樣品輸入以及沖洗的操作是通過注射器或者微流泵來實(shí)現(xiàn)的。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的基于免疫磁珠標(biāo)記細(xì)胞的分級篩選方法，其特征在于，上層腔體的左側(cè)設(shè)置有樣本進(jìn)樣口，頂部設(shè)置有細(xì)胞收集口和縱向水流注入口，右側(cè)設(shè)有下一級連接口；而在下層腔體的底部設(shè)置有出入口，可用于免疫磁珠的收集和反沖水流的注入。