[發明專利]一種基于重組核受體蛋白的生物效應物質高通量篩查鑒定方法

有效

• 申請號: 201810775059.6
• 申請日: 2018-07-13
• 公開（公告）號: CN109085361B
• 公開（公告）日: 2020-09-29
• 發明（設計）人: 胡建英;張虹;賈映亭;胡文欣;張照斌
• 申請（專利權）人: 北京大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N30/02
• 代理公司: 北京君尚知識產權代理有限公司 11200
• 代理人: 余長江

1.一種基于重組核受體蛋白的生物效應物質篩查鑒定方法，其步驟包括：

將帶標簽的選定重組核受體蛋白與待測環境介質混合，使上述重組核受體蛋白結合環境介質中的生物效應物質；

將結合生物效應物質的重組核受體蛋白固定到磁珠載體上；

洗脫得到核受體蛋白與生物效應物質的混合物；

對混合物進行液液萃取得到樣品；

采用不表達上述重組核受體蛋白的空載體蛋白，基于上述同樣過程得到對照；

篩選樣品與對照之間的差異化合物；

通過化學數據庫和質譜數據庫搜索以鑒定上述差異化合物。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，對差異物質的篩選采用的多元統計方法包括主成分分析和正交偏最小二乘判別分析，根據變量重要性因子VIP、非參數T檢驗、樣品組與對照組峰面積倍數關系(fold change)來篩選上述差異化合物，篩選條件為：VIP1,p0.05,fold change1和VIP1,p0.05,fold change10。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，通過在線化學數據庫EPA Toxcast結合質譜數據庫對上述差異化學物的結構進行搜庫鑒定，搜庫鑒定的限制條件為：一級精確質量數小于5ppm，二級碎片質量數小于5ppm，同位素相似度大于80％，元素組成限制為C：0-100；H：0-150；O：0-40；N：0-20；P：0-10；S：0-10；Br：0-30；Cl：0-30；F：0-30，所述質譜數據庫包括mzCloud質譜數據庫和本地質譜庫。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，上述重組核受體蛋白包括：AR,ERα,ERβ,ERγ,PR,GR,ERR,PPARα,PPARδ,PPARγ,RXRα,RXRβ,RXRγ,RARα,RARβ,RARγ,TRα,TRβ,VDR,PXR,CAR,LXRα,LXRβ,FXR,AhR重組核受體蛋白。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，重組核受體蛋白是帶有組氨酸(His)標簽的人核受體蛋白，所述磁珠為Ni²⁺鰲合的磁珠。