[發(fā)明專利]一類腺苷衍生物在人急性髓性白血病細胞中的應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810769802.7
• 申請日: 2018-07-13
• 公開（公告）號: CN108685936A
• 公開（公告）日: 2018-10-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 程嬌;王黎;崔昌浩;劉勝先;潘慧;林凡琳
• 申請（專利權(quán)）人: 大連理工大學
• 主分類號: A61K31/7076
• 分類號: A61K31/7076;A61P35/02
• 代理公司: 大連理工大學專利中心 21200
• 代理人: 溫福雪;侯明遠

本發(fā)明提供了一類腺苷衍生物在人急性髓性白血病細胞中的應(yīng)用，屬于生物化學與分子生物學技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的數(shù)據(jù)建立在腺苷衍生物oTR、KR、BAR、iPR對人的9大瘤系60種腫瘤細胞系具有非常顯著的體外增殖抑制活性，其中對白血病細胞株的藥物敏感性最強的基礎(chǔ)之上。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及腺苷衍生物ortho-Topolin Riboside(oTR)、Kinetin riboside(KR)、N⁶-Benzyladenosine(BAR)、N6-Isopentenyladenosine(iPR)對人急性髓系白血病細胞株的促分化抗腫瘤作用，屬于生物化學與分子生物學技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

目前越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，細胞分裂素不僅調(diào)節(jié)植物的生長發(fā)育同時對動物細胞的增殖和生長也具有重要作用。研究發(fā)現(xiàn)細胞分裂素ortho-Topolin Riboside(oTR)、Kinetin riboside(KR)、N⁶-Benzyladenosine(BAR)、N6-Isopentenyladenosine(iPR)在體外對癌細胞具有很強的毒性和促凋亡作用。從結(jié)構(gòu)上看，可知這些細胞分裂素均屬于腺苷衍生物。當用這些細胞分裂素處理癌細胞后導致細胞周期不同程度的受阻和(或者)凋亡，這主要取決于不同的細胞系對不同的腺苷衍生物的敏感度。盡管天然的CK和它們的類似物對動物細胞的作用已經(jīng)被多次報道，但是目前還沒有一個系統(tǒng)的對這些腺苷衍生物的促分化作用進行研究。

急性髓細胞樣白血病(AML)是一種發(fā)展為骨髓細胞的克隆性血液系統(tǒng)惡性疾病，其特征在于正常造血細胞分化中不受控制的增殖和阻斷，全反式維甲酸(ATRA)可以通過誘導分化來治愈獨特的AML亞型---急性早幼粒細胞白血病(APL)。然而，ATRA介導的分化療法不適用于其他類型的AML并且ATRA誘導療法尚存在療效不穩(wěn)定、部分患者易復發(fā)等問題。因此，AML治療迫切需要能夠克服分化停滯的新型毒性較低的治療劑。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供了一類腺苷衍生物ortho-TopolinRiboside(oTR)、Kinetin riboside(KR)、N⁶-Benzyladenosine(BAR)、N6-Isopentenyladenosine(iPR)在人白血病細胞株U937中促分化的應(yīng)用。

本發(fā)明的技術(shù)方案：

一類腺苷衍生物在人急性髓性白血病細胞中的應(yīng)用，步驟如下：

(1)細胞培養(yǎng)：將人急性白血病細胞株U937懸浮于含有滅活胎牛血清的無菌的DMED培養(yǎng)液中，置于濃度為5％CO₂、相對濕度為90％、溫度為37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細胞長至培養(yǎng)瓶底面積的70％～80％傳代1次；

(2)藥物配制：oTR、KR、BAR、iPR均用0.1％DMSO溶解，繼續(xù)用無菌DMEM培養(yǎng)基將溶解好的oTR、KR、BAR、iPR均稀釋至濃度為0.1μM-30μM，過濾除菌，室溫保存；

(3)處理細胞：將步驟(1)處于對數(shù)生長期的5×10⁴～1×10⁵個細胞接種于每孔含有1mlDMEM培養(yǎng)液的24孔板中，設(shè)置8組實驗，第1組：空白對照組；第2組：10μMoTR組；第3組：10μM KR；第4組：10μM BAR；第5組：10μM iPR組；向各組中加入對應(yīng)的藥物，置于濃度為5％CO₂、相對濕度為90％、溫度為37℃的培養(yǎng)箱中孵育36小時，收集細胞；

(4)檢查分化指標：收集步驟(3)處理的細胞并用含0.2％FBS的PBS洗滌三次；將細胞與封閉抗體在室溫下孵育15分鐘，然后在4℃在黑暗中與抗人CD11b-PE抗體溫育30分鐘后洗滌細胞，并通過流式細胞術(shù)分析；