[發明專利]一類腺苷衍生物在人急性髓性白血病細胞中的應用

在審

• 申請號: 201810769802.7
• 申請日: 2018-07-13
• 公開（公告）號: CN108685936A
• 公開（公告）日: 2018-10-23
• 發明（設計）人: 程嬌;王黎;崔昌浩;劉勝先;潘慧;林凡琳
• 申請（專利權）人: 大連理工大學
• 主分類號: A61K31/7076
• 分類號: A61K31/7076;A61P35/02
• 代理公司: 大連理工大學專利中心 21200
• 代理人: 溫福雪;侯明遠

1.一類腺苷衍生物在人急性髓性白血病細胞中的應用，其特征在于，步驟如下：

(1)細胞培養：將人急性白血病細胞株U937懸浮于含有滅活胎牛血清的無菌的DMED培養液中，置于濃度為5％CO₂、相對濕度為90％、溫度為37℃的培養箱中培養，細胞長至培養瓶底面積的70％～80％傳代1次；

(2)藥物配制：oTR、KR、BAR、iPR均用0.1％DMSO溶解，繼續用無菌DMEM培養基將溶解好的oTR、KR、BAR、iPR均稀釋至濃度為0.1μM-30μM，過濾除菌，室溫保存；

(3)處理細胞：將步驟(1)處于對數生長期的5×10⁴～1×10⁵個細胞接種于每孔含有1mlDMEM培養液的24孔板中，設置8組實驗，第1組：空白對照組；第2組：10μMoTR組；第3組：10μM KR；第4組：10μM BAR；第5組：10μM iPR組；向各組中加入對應的藥物，置于濃度為5％CO₂、相對濕度為90％、溫度為37℃的培養箱中孵育36小時，收集細胞；

(4)檢查分化指標：收集步驟(3)處理的細胞并用含0.2％FBS的PBS洗滌三次；將細胞與封閉抗體在室溫下孵育15分鐘，然后在4℃在黑暗中與抗人CD11b-PE抗體溫育30分鐘后洗滌細胞，并通過流式細胞術分析；

(5)檢測細胞形態變化：收集步驟(3)處理的細胞并用含0.2％FBS的PBS洗滌三次；將載玻片用甲醇固定，并用賴特-吉姆薩染色溶液染色20分鐘，用蒸餾水漂洗，風干并使用顯微鏡觀察。