[發明專利]一種由羊白細胞介素2、羊干擾素γ和羊干擾素τ組成的融合蛋白及其制備方法

在審

• 申請號: 201810768831.1
• 申請日: 2018-07-13
• 公開（公告）號: CN108840953A
• 公開（公告）日: 2018-11-20
• 發明（設計）人: 徐慕珍;高耀輝;周煒;楊建偉;王紅朵;鮑可兵;付超;劉家爐
• 申請（專利權）人: 蕪湖英特菲爾生物制品產業研究院有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;A61K38/21;A61P31/12;A61P37/04;A61K38/20
• 代理公司: 蕪湖安匯知識產權代理有限公司 34107
• 代理人: 尹婷婷

本發明公開了一種由羊白細胞介素2、羊干擾素γ和羊干擾素τ組成的融合蛋白及其制備方法，所述融合蛋白由羊白細胞介素2、羊干擾素γ和羊干擾素τ經柔性linker連接而形成，融合蛋白與凍干保護劑混配后經冷凍干燥即可得到重組羊長效干擾素。所述重組羊長效干擾素可顯著提高羊干擾素的半衰期，較普通羊干擾素的半衰期提高15倍以上，并具有廣譜抗病毒作用并能提高羊自身的免疫應答。

技術領域

本發明屬于生物基因工程技術領域，具體涉及由羊白細胞介素2、羊干擾素γ和羊干擾素τ組成的融合蛋白及其制備方法。

背景技術

由病毒引起的動物傳染性疾病嚴重制約了各個國家和地區養殖業的健康發展，中國是世界上羊存欄量、出欄量、羊肉產量最多的國家，肉羊產業也是我國畜牧業的重要支柱產業之一。隨著羊養殖業的持續發展，不可避免的要面對病毒引起的疾病問題，畜類疾病不僅給羊養殖者造成巨大的經濟損失，更為嚴重的是，一些人獸共患傳染性疾病還給人類健康帶來潛在威脅。

目前羊類傳染性疾病的防治主要采用疫苗免疫和藥物治療，由于疫苗免疫的血清型單一，而病毒的血清型復雜，毒株變異快，常導致疫苗免疫失敗。一些病毒病目前尚無疫苗可用，有些病毒也可能直接危害到人類的健康。

常用的藥物治療主要采用抗生素進行治療，但是近年來由于抗生素的廣泛和大量使用，導致耐藥性菌株大量產生，并通過食物鏈傳染給人，給人類健康帶來更大的威脅。現在一些國家己明令禁止一些抗生素和抗菌劑在養殖業中的應用。因此，使用干擾素來積極治療和預防家畜、家禽的病毒性疾病將是人類最為關注的問題。

IFN是一類病毒感染誘導機體產生具有廣譜抗病毒、抗腫瘤和具有免疫調節作用的蛋白質，1957年Issacs和Lindeman首先發現，它是一類多功能的細胞因子，與細胞受體結合后，可誘導機體產生多種特異性蛋白質和酶類，主要通過抑制病毒基因轉錄和降解病毒RNA來抑制病毒的生長繁殖以及發揮抗腫瘤等的活性。

干擾素-τ(interferon tau，IFN-τ)最初被稱為滋養層蛋白，由滋養層分泌的一類新型的I型IFN，是反芻動物母體妊娠識別的孕體信號，在黃體維持和妊娠建立過程中發揮重要的生物學功能。干擾素-τ具有Ⅰ型干擾素的共同特性:具有抗病毒、抗細胞增生、免疫調節等功能。IFN-τ在生物學功能方面有自身特點，它僅在胚胎滋養層細胞中表達，無需病毒誘導，而且比IFN-τ/β更少的細胞毒性。基于其特有的生物學活性及低細胞毒性，IFN-τ為許多疾病的治療帶來新的希望。

γ型IFN是由激活的T細胞和NK細胞產生，具有較強抗病毒和免疫調節功能。大量研究表明，干擾素γ除了具有廣譜抗病毒功能外，對免疫系統也起著關鍵的調節作用，所以IFN-γ又稱為免疫調節干擾素。雖然各種類型的干擾素均能夠介導細胞對病毒感染的反應，但干擾素γ的免疫調節活性在協調免疫反應和確定機體長期的抗病毒狀態中發揮更為重要的作用，因此干擾素γ具有極為重要的臨床應用價值。

細胞因子IL-2即白細胞介素2，又名T細胞生長因子。主要由活化的T淋巴細胞產生的具有廣泛生物活性的細胞因子，既可以促進淋巴細胞增殖，增強免疫功能，又能限制T細胞反應而增強機體的免疫耐受，故可用于治療腫瘤、感染性疾病和自身免疫性疾病。在獸醫中，由于IL-2能提高疫苗的免疫應答和減少疾病的發生，也出現廣闊的應用前景。IL-2因能增強機體的免疫水平，提高機體的抗病能力，因而用于細菌性、病毒性和寄生蟲性疾病的免疫治療。此外，IL-2還可影響藥物的代謝，使藥物的代謝時間延長，作用時間增加，從而提高藥物療效。

天然干擾素及人工重組干擾素目前普遍存在半衰期短的局限，半衰期一般為2-4個小時。半衰期短給治療帶來了極大的不便，治療次數的增加，相應的時間成本及經濟成本隨之增加，而機體的耐受極限也有可能被突破導致不良反應的產生。半衰期短的主要原因有兩個：干擾素的分子量過小在體內代謝過快，干擾素尤其是重組干擾素親和力較差被免疫系統清除。