[發(fā)明專利]一種由羊白細胞介素2、羊干擾素γ和羊干擾素τ組成的融合蛋白及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810768831.1
• 申請日: 2018-07-13
• 公開（公告）號: CN108840953A
• 公開（公告）日: 2018-11-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐慕珍;高耀輝;周煒;楊建偉;王紅朵;鮑可兵;付超;劉家爐
• 申請（專利權(quán)）人: 蕪湖英特菲爾生物制品產(chǎn)業(yè)研究院有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;A61K38/21;A61P31/12;A61P37/04;A61K38/20
• 代理公司: 蕪湖安匯知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 34107
• 代理人: 尹婷婷

1.一種由羊白細胞介素2、羊干擾素γ和羊干擾素τ組成的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白的氨基酸序列表如SEQUENCE LISTING 400〈1〉所示。

2.一種編碼如權(quán)利要求1所述的融合蛋白的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列表如SEQUENCE LISTING 400〈2〉所示，記為基因組1；或如SEQUENCE LISTING 400〈3〉所示，記為基因組2。

3.含有如權(quán)利要求2所述基因的表達載體。

4.含有如權(quán)利要求2所述基因的基因工程菌。

5.一種重組羊長效干擾素，其特征在于，所述重組羊長效干擾素由權(quán)利要求1所述的融合蛋白與凍干保護劑混配之后，經(jīng)冷凍干燥而成。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的融合蛋白的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：將權(quán)利要求3所述的表達載體導(dǎo)入到大腸桿菌宿主細胞中，獲得基因工程菌，基因工程菌經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達后得到所述融合蛋白的粗品，經(jīng)純化后即可得到融合蛋白。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述基因工程菌為pET-32a/rIL2-IFNγ-IFNτ，其制備方法為：

(1)設(shè)計引物，通過反轉(zhuǎn)錄得到或人工合成帶有柔性linker序列的羊白細胞介素2、羊干擾素γ、羊干擾素τ的目的基因；通過柔性linker將羊白細胞介素2、羊干擾素γ、羊干擾素τ的目的基因連接起來，連接后的目的基因的核苷酸序列表如SEQUENCE LISTING 400〈2〉所示或如SEQUENCE LISTING 400〈3〉所示；

(2)將連接后的目的基因連接到pET-32a質(zhì)粒上獲得表達載體；

(3)將表達載體導(dǎo)入到大腸桿菌宿主細胞中，即可得到基因工程菌pET-32a/rIL2–IFNγ-IFNτ。

8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的制備方法，其特征在于，所述大腸桿菌宿主細胞為BL21(DE3)感受態(tài)細胞或帶有pGro7質(zhì)粒的BL21(DE3)感受態(tài)細胞。

9.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的制備方法，其特征在于，所述純化的方法為：融合蛋白的粗品先后經(jīng)親和層析、陰離子交換層析和分子篩層析純化。

10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的重組羊長效干擾素的應(yīng)用，其特征在于，所述重組羊長效干擾素的半衰期長達60小時以上，具有廣譜抗病毒作用并能提高羊自身的免疫應(yīng)答。