[發明專利]分離紅霉素B的方法以及制備紅霉素B對照品的方法

在審

• 申請號: 201810768777.0
• 申請日: 2018-07-13
• 公開（公告）號: CN108864229A
• 公開（公告）日: 2018-11-23
• 發明（設計）人: 梁桂挺;辛立波;劉國柱
• 申請（專利權）人: 廣東東陽光藥業有限公司
• 主分類號: C07H17/08
• 分類號: C07H17/08;C07H1/06
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 趙天月

本發明提出了一種分離紅霉素B的方法。該方法包括：將紅霉素樣品進行高效液相色譜分離，以便獲得紅霉素B；其中，所述高效液相色譜分離的條件如下所示：色譜柱：DAC?HB100，填料ACCHROM C18TDE(100*250mm,10um)；色譜柱溫度：室溫；流動相：0.01～0.02mol/L磷酸氫二鉀?乙腈，所述0.01mol/L磷酸氫二鉀和乙腈的體積比為50:50～50：55，所述磷酸氫二鉀預先溶于水中；流速：450～470mL/min；等度洗脫；檢測波長215nm。根據本發明實施例的方法，相比于現有技術，流動相無需調節pH值，節省了時間成本。根據本發明實施例的方法能夠高效地將紅霉素B從紅霉素樣品中分離出來，為后續紅霉素B對照品的制備奠定了良好的基礎。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體地，本發明涉及分離紅霉素B的方法以及制備紅霉素B對照品的方法。

背景技術

紅霉素(Erythromycin,簡稱EM)是一種大環內酯類廣譜抗生素。目前已知其中有六種異構體，分別為紅霉素A，B，C，D，E和F，A為主要活性成分。紅霉素B的理化性質及抗菌譜與紅霉素A相似，但抗菌活性卻只有紅霉素A的30％～60％。

高純度的紅霉素組分對照品對于紅霉素的研究工作有著十分重要的意義。

而紅霉素A與紅霉素B的性質相似，一般的分離手段很難將其分離開來。現有的紅霉素B對照品的純化技術主要為專利CN 102924547 A所提及的純化方法，該方法主要采用高效液相色譜儀將紅霉素B從紅霉素樣品分離洗脫出來，再將洗脫液pH調為酸性，加入醋酸丁酯萃取，取水相，然后將水相pH調為堿性，用氯仿萃取，取氯仿層，氯仿層再用純水洗兩次，收集氯仿層，蒸干，得到紅霉素B，但該方法的純度最高只有93.4％。

而歐洲藥典委員會出售的紅霉素B對照品，但價格非常昂貴，不利于普及使用。

因此，紅霉素B對照品的純化方法仍有待開發和改進。

發明內容

本申請是基于發明人對以下事實和問題的發現和認識作出的：

專利CN 102924547 A所提及的純化方法步驟繁瑣，采用兩次萃取，時間成本較高，而且紅霉素B為弱極性化合物，水溶性較差，第一步在酸性體系下萃取，紅霉素B回收率低，且產品純度達不到歐洲藥典委員會對雜質對照品純度要求(95％以上)，另外專利實施案例中采用高效液相色譜分離洗脫上樣量只有0.1g/針，效率極其低下。基于發明人對現有技術問題的發現和認識，發明人提出了一種改良的紅霉素B對照品的制備方法，該方法能夠高效、低成本地制備獲得純度95％以上的紅霉素B對照品。

在本發明的第一方面，本發明提出了一種分離紅霉素B的方法。根據本發明的實施例，所述方法包括：將紅霉素樣品進行高效液相色譜分離，以便獲得紅霉素B；其中，所述高效液相色譜分離的條件如下所示：色譜柱：DAC-HB100，填料ACCHROM C18TDE(100*250mm,10um)；色譜柱溫度：室溫；流動相：0.01～0.02mol/L磷酸氫二鉀-乙腈，所述0.01mol/L～0.02mol/L磷酸氫二鉀和乙腈的體積比為50:50～50：55，所述磷酸氫二鉀預先溶于水中；流速：450～470mL/min；等度洗脫；檢測波長215nm。根據本發明實施例的方法中流動相采用0.01～0.02mol/L磷酸氫二鉀，其pH約為9.2左右，而紅霉素樣品本身為堿性化合物，因此，流動相無需調節pH即可用于紅霉素樣品的分離，相比于現有技術，節省了時間成本。并且發明人發現，該流動相很好的緩沖能力可以使得紅霉素樣品中各被分離的物質具有良好的峰形，利用該方法還可以實現較高的上樣量，根據本發明實施例的方法能夠高效地將紅霉素B從紅霉素樣品中分離出來，為后續紅霉素B對照品的制備奠定了良好的基礎。

根據本發明的實施例，上述方法還可以進一步包括如下附加技術特征至少之一：