[發明專利]宮頸癌的檢測方法

在審

• 申請號: 201810768528.1
• 申請日: 2018-07-13
• 公開（公告）號: CN110714074A
• 公開（公告）日: 2020-01-21
• 發明（設計）人: 林東旭;魏國鵬
• 申請（專利權）人: 南京格致基因生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6851
• 代理公司: 11038 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 韓威威;羅菊華

本發明涉及一種宮頸癌的檢測方法，其包括通過檢測3號染色體上的3q擴增熱點區域的相對拷貝數來確定受試者是否患有宮頸癌或處于發展宮頸癌的風險中。更具體地，本發明涉及通過實時定量PCR(qPCR)來檢測3號染色體上的3q擴增熱點區域的相對拷貝數。本發明還涉及用于檢測宮頸癌的試劑盒。

技術領域

本發明涉及一種宮頸癌的檢測方法，其包括通過檢測3號染色體上的3q擴增熱點區域的相對拷貝數來確定受試者是否患有宮頸癌或處于發展宮頸癌的風險中。更具體地，本發明涉及通過實時定量PCR (qPCR)檢測3號染色體上的3q擴增熱點區域的相對拷貝數。本發明還涉及用于檢測宮頸癌的試劑盒。

發明背景

宮頸癌在世界范圍內是位居女性第3位最常見疾病和病死率位居第4位的癌癥，且近年來其發病年齡呈明顯年輕化趨勢。尤其是在發展中國家，由于宮頸癌篩查工作的不完善，其發生率是發達國家的6 倍，且發病率每年在以2％-3％的速度增長。宮頸癌的發生和發展有一個漸進的演變過程，時間可以從數年到數十年，一般認為演變分幾個階段：輕度(CINI)、中度(CINII)和重度上皮內瘤樣病變(CINIII)、浸潤癌。所以對CINIII進行有效篩查可以很好的降低宮頸癌患病率，從而降低癌癥死亡率。

宮頸癌的病因學研究已證實主要是人乳頭瘤病毒(HPV)感染。 HPV有多種亞型，約40種涉及生殖道感染，其中高危型HPV(16、 18、31、33、35、39、45、51、52、56、58，59和69)持續感染，尤其是HPV16、18型可以引發宮頸癌。但是HPV感染并不一定會導致宮頸癌，此外絕大多數HPV感染者1-2年內可以通過自身免疫系統來清除HPV病毒，從而避免癌癥。而目前針對宮頸癌的早期篩查仍然以細胞學檢查占主要地位。TCT即液基薄層細胞檢測是目前國際上較先進的一種宮頸脫落細胞學檢查技術，與傳統的宮頸刮片巴氏涂片檢查相比明顯提高了標本的滿意度及宮頸異常細胞檢出率，有數據顯示細胞學篩查CINII級及以上級別病變的靈敏度和特異度分別為 51.5％和73.4％，而HPV檢測同一病變的靈敏度和特異度分別為88.2％和57.8％。TCT方法的特異性高，HPV檢測的靈敏度高。所以兩種方法對于宮頸癌和癌前病變的篩查各有利弊。

雖然HPV檢測應用廣泛，但是罹患宮頸癌的患者中有5-10％發現是HPV陰性，說明這些患者的癌變機制和HPV感染無關，對這一類人群進行HPV早期癌癥篩查是無效的。TCT檢測同樣存在問題，由于方法本身限制只能觀察細胞學形態，所以人為因素影響比較大，而且不能提供更深層次比如基因方面的信息。陰道鏡作為一種常規的臨床檢測方法的準確率更是很大程度上取決于是否能夠觀察到完整的轉化區，但由于患者的年齡、病變累及宮頸的范圍及嚴重程度、陰道鏡的分辨率、臨床醫師的操作及診斷水平等差異，其本身就存在診斷不足及診斷過度的問題。有研究將陰道鏡下宮頸活檢病理與最終診斷病理結果進行比較得出，其CINIII級及原位癌的診斷不足率為42％。

因此，仍然需要用分子標志物來直接鑒定宮頸癌并監測疾病進展的方法。

發明概述

本發明提供了一種與宮頸癌相關的拷貝數變異(CNV)標志物。具體地，本發明人令人驚訝地發現，三號染色體長臂(3q)中特定區域(在本發明中稱為3q擴增熱點區域)的拷貝數擴增可以作為判斷宮頸癌發生的標志物。在優選的實施方案中，3q擴增熱點區域的拷貝數擴增特別適合用于檢測CINII級及以上級別的宮頸癌病變。

在一個方面，本發明提供了一種確定受試者是否患有宮頸癌或處于發展宮頸癌的風險中的方法，所述方法包括：

a.提供來自所述受試者的樣品，和

b.檢測3號染色體上的3q擴增熱點區域的相對拷貝數，

其中與對照樣品中3q擴增熱點區域的相對拷貝數相比，所述受試者的樣品中3q擴增熱點區域的相對拷貝數的升高指示所述受試者患有宮頸癌或處于發展宮頸癌的風險中。