[發明專利]一種蠶蛹蛋白多肽螯合鈣的制備方法

有效

• 申請號: 201810767538.3
• 申請日: 2018-07-13
• 公開（公告）號: CN108866134B
• 公開（公告）日: 2021-12-21
• 發明（設計）人: 王思遠;廖森泰;鄒宇曉;穆利霞;胡騰根;王衛飛;林光月
• 申請（專利權）人: 廣東省農業科學院蠶業與農產品加工研究所
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/107;C07K1/14
• 代理公司: 廣州知友專利商標代理有限公司 44104
• 代理人: 宣國華

1.一種蠶蛹蛋白多肽螯合鈣的制備方法，其特征在于，包含以下步驟：

（1）預處理：將蠶蛹篩選去雜質，經低溫烘干粉碎后，過60目篩，并進行脫脂除臭，得到蠶蛹粉；

（2）蠶蛹蛋白多肽的制備：向步驟（1）得到的蠶蛹粉中加入水，所述蠶蛹粉和所加入水的質量比為1：10～1：20，過膠體磨，過濾，然后向濾液中加入步驟（1）所述蠶蛹粉質量2～5%的堿性蛋白酶進行酶解，酶解結束后進行滅酶，并加入活性炭進行脫腥脫色，經離心、膜分離后得到蠶蛹蛋白多肽；所述膜分離的過程中，依次使用3000Da和1000Da的超濾膜截留離心后的上清液，分離得到1000～3000Da蠶蛹蛋白多肽；

（3）蠶蛹蛋白多肽的改性：使用磷酸化試劑對步驟（2）所制得的蠶蛹蛋白多肽進行改性，得到改性蠶蛹蛋白多肽；

（4）鈣源的制備：配制氯化鈣的水溶液，或將步驟（2）中過濾后得到的濾渣用于酸解制鈣，所述的氯化鈣水溶液或所述酸解制鈣后的溶液即為鈣離子溶液；

（5）螯合反應：將步驟（3）制得的改性蠶蛹蛋白多肽和步驟（4）制得的鈣離子溶液混合，調節所述改性蠶蛹蛋白多肽與鈣離子溶液中的鈣離子質量的比例為2：1～10:1，在50～75℃、pH為6～8的條件下螯合反應0.5～1.5h；

（6）蠶蛹蛋白多肽螯合鈣的純化：在步驟（5）所述的螯合反應結束后，對反應液進行醇洗，經離心、干燥后得到蠶蛹蛋白多肽螯合鈣；

步驟（2）所述的酶解過程中，酶解溫度為50～60℃，pH值為8～9，酶解時間為3～5h，滅酶過程中，使用95℃的水浴加熱滅酶10～15min；

步驟（3）所述的改性過程中，先將步驟（2）制得的蠶蛹蛋白多肽調節至濃度為20～100g/L，加入磷酸化試劑至磷酸化試劑濃度為2～10g/L，反應溫度為40～60℃，pH值為5～10，反應1～2h，反應結束后透析24～48h；所述的磷酸化試劑為六偏磷酸鈉、三聚磷酸鈉、磷酸、多聚磷酸鈉或三氯氧磷中的一種。

2.根據權利要求1所述的蠶蛹蛋白多肽螯合鈣的制備方法，其特征在于，步驟（1）中所述的蠶蛹為鮮家蠶蛹或繅絲蠶蛹。

3.根據權利要求1所述的蠶蛹蛋白多肽螯合鈣的制備方法，其特征在于，步驟（1）所述脫脂除臭的過程中，以正己烷、丙酮為萃取劑，以料液質量比1:3～1:4的比例萃取8～10h，然后進行減壓蒸餾，將蒸餾后剩余的固體取出烘干，得到蠶蛹粉。

4.根據權利要求1所述的蠶蛹蛋白多肽螯合鈣的制備方法，其特征在于，步驟（2）加入活性炭進行脫腥脫色的過程中，加入酶解產物質量4～6%的活性炭，并在40～45℃水浴的條件下加熱40～50min，所述的離心過程的條件為在6000r/min的速度下離心15～20min。

5.根據權利要求1所述的蠶蛹蛋白多肽螯合鈣的制備方法，其特征在于，步驟（4）所述酸解制鈣的過程中，使用馬弗爐將所述濾渣在520～550℃的溫度下灼燒3～5h，將灰分冷卻后，加入3%的鹽酸溶液進行酸解，得到鈣離子溶液。

6.根據權利要求1所述的蠶蛹蛋白多肽螯合鈣的制備方法，其特征在于，步驟（6）所述的醇洗過程中，向步驟（5）螯合反應后的反應液中加入3～5倍體積的95%酒精，離心過程在6000r/m的速度下離心15～20min。