[發明專利]同時測定血漿中姜黃素和5-氟尿嘧啶濃度的HPLC分析方法

有效

• 申請號: 201810761763.6
• 申請日: 2018-07-12
• 公開（公告）號: CN108956816B
• 公開（公告）日: 2021-12-24
• 發明（設計）人: 趙領;皮超;魏郁夢;徐婷;梁靖;趙仕杰;楊紅茹;郭璞;胡美;左英
• 申請（專利權）人: 西南醫科大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/74;G01N30/88
• 代理公司: 重慶華科專利事務所 50123
• 代理人: 夏洪

1. 一種同時測定血漿中姜黃素和5-氟尿嘧啶濃度的HPLC分析方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一、標準品溶液的制備

將姜黃素標準品和5-氟尿嘧啶標準品按摩爾比為1:1混合，用甲醇溶解，得姜黃素和5-氟尿嘧啶的混合標準品母液，再用甲醇稀釋，得一系列濃度的姜黃素和5-氟尿嘧啶的混合標準品溶液；

步驟二、樣品預處理

取一系列等量的動物空白血漿，分別加入等量的步驟一所述的一系列濃度的姜黃素和5-氟尿嘧啶混合標準品溶液，得一系列待測動物血漿樣品，向各待測動物血漿樣品中加入檸檬酸溶液或酒石酸溶液，渦旋，加入萃取劑，旋渦、離心，取上層有機溶液氮氣吹干得干燥物，向干燥物中加入復溶劑，渦旋、離心，取上清液即為供試品溶液；

步驟三、樣品分離

采用色譜柱為Inertsil ODS-SP C18，5μm，4.6 × 250 mm，保護柱Phenomenex C18，4.0 × 3.0 mm；柱溫25 ℃，進樣量20μL，分別以甲醇和水混合液、乙腈和緩沖液混合液為流動相，對各供試品溶液進行梯度洗脫；

步驟四、檢測樣品峰面積

對進HPLC分析的供試品溶液采用通用型紫外檢測器檢測峰面積，在425 nm波長處檢測姜黃素的峰面積，在265nm波長處檢測5-氟尿嘧啶的峰面積，經過25～30分鐘HPLC分析后得到姜黃素和5-氟尿嘧啶的峰面積；

步驟五、制作標準曲線

分別以動物血漿樣品中姜黃素和5-氟尿嘧啶的濃度為橫坐標，對應的姜黃素和5-氟尿嘧啶的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線得到標準曲線方程；將姜黃素和5-氟尿嘧啶的峰面積帶入標準曲線方程中換算得姜黃素和5-氟尿嘧啶的濃度；

所述檸檬酸溶液或酒石酸溶液的濃度為0.03～0.18 g/ml；

所述復溶劑為甲醇和2 %吐溫80的混合溶液，體積比為3:7；

步驟三中梯度洗脫的程序包括：按體積百分比計，0～12.4 min，甲醇：水1:99，v/v為流動相，流速為0.8 ml/min，檢測波長265 nm；12.5～22.5 min，乙腈：0.1 %磷酸緩沖液65:35，v/v為流動相，流速為1.0 ml/min，檢測波長425 nm；22.6～30 min，甲醇：水1:99，v/v為流動相，流速為0.8 ml/min，檢測波長265 nm；

所述0.1 %磷酸緩沖液為用三乙胺調節pH至3.5的0.1 %磷酸溶液；

所述萃取劑為乙酸乙酯和甲醇的混合液，兩者的體積比為9:1。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟二中所述的加入復溶劑之前的離心為8000r/min、 離心3 min；加入復溶劑之后的離心為10000r/min 、離心10 min。