[發(fā)明專利]一種血清中HBV DNA的實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810755701.4
• 申請(qǐng)日: 2018-07-11
• 公開（公告）號(hào): CN108796133B
• 公開（公告）日: 2021-08-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張曉瑋;林若琳;羅園香;楊芬;石壯壯;彭春梅;張嘉;鄧可基;李家導(dǎo);陳觀芝;蔡佺佑;蔡培宏;顏道宇;王旭川;黃彩蘭;李思成;邢蘭坤;王星;王法
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州海力特生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/6851;C12Q1/6806
• 代理公司: 北京精金石知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11470
• 代理人: 張黎

1.一種血清中HBV DNA的實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于：

所述的實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)試劑盒包括：

乙型肝炎病毒HBV的檢測(cè)引物組；

乙型肝炎病毒HBV的檢測(cè)探針；

和裂解液；

所述的裂解液包括5％-25％(V/V)的多果定、5-10％(V/V)Tween-20、10-50mM檸檬酸鈉和10-100mM NaCl。

2.如權(quán)利要求1所述的實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于：

所述的乙型肝炎病毒HBV的檢測(cè)引物組為引物組A或引物組B；

所述的引物組A由以下引物序列組成：

引物序列1：GGCAACGGCCTGGTCTGTGCCAAGTGT，

引物序列2：GGCAACGGTCAGGTCTCTGCCAAGTGT，

引物序列3：TGACGCAACCCCCACTG，

引物序列4：GCTGCGAGCAAAACAAG，

引物序列5：GCGCAGGATCCAGTTGGCAGCACA，

引物序列6：GTCCCGCGCAGGATCCAGTTGGCAGC；

所述的引物組B由以下引物序列組成：

引物序列7：GCCGACAGTATCTGAACCTTTACCCCGTTG，

引物序列8：GCAACGGTCAGGTCTGTGCCAAGTGTTT，

引物序列9：GCTGACGCAACCCCCAC，

引物序列10：CGGCTGCGAGCAAAACA，

引物序列11：CCGCGCAGGATCCAGTTGGCAGCACA，

引物序列12：CCCGCGCAGGATCCAGTTGGCAGCAC。

3.如權(quán)利要求1所述的實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于：

所述的乙型肝炎病毒HBV的檢測(cè)探針為以下四條探針序列中的任意一條：

探針序列1：CCGATCCATACTGCGGAACT，

探針序列2：CCGATCCATACTGCGGAAC，

探針序列3：GCCGATCCATACTGCGGAACT，

探針序列4：GCCGATCCATACTGCGGAAC；

所述的乙型肝炎病毒HBV的檢測(cè)探針序列5’端標(biāo)記的熒光基團(tuán)為FAM、HEX、VIC、CY5、TET中一種，探針序列3’端標(biāo)記的淬滅基團(tuán)為TAMRA、MGB、BHQ中一種。

4.如權(quán)利要求1所述的實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于：

所述的實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)試劑盒還包括內(nèi)控探針和內(nèi)控引物組；

所述的內(nèi)控探針的核苷酸序列為：

內(nèi)控探針序列5：ATGCCCTCCCCCATGCCATCCT；或者為其核苷酸互補(bǔ)序列；

內(nèi)控探針序列所標(biāo)記的熒光基團(tuán)可從FAM、HEX、VIC、CY5、TET選擇，但不同于權(quán)利要求3所述探針的熒光基團(tuán)；

所述的內(nèi)控引物組的核苷酸序列為：

內(nèi)控引物序列13：CGGGGTCACCCACACTGTGCCCATCTACG，

內(nèi)控引物序列14：GGTCACCCACACTGTGCCCATCTACG，

內(nèi)控引物序列15：CCACACTGTGCCCATCTACGA，

內(nèi)控引物序列16：GCGCTCGGTGAGGATCTTC。

5.如權(quán)利要求1所述的實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于：

所述的試劑盒還包括PCR反應(yīng)液，所述的PCR反應(yīng)液包括：15-25mM Tris-HCl pH8.0，15-25mM KCl，2.5-5Mm (NH₄)SO₄，2-5mM MgCl₂，0.5-2mM dNTP/UTP Mix。

6.如權(quán)利要求1所述的實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于：

所述的實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)試劑盒還包括強(qiáng)陽性對(duì)照品、臨界陽性對(duì)照品、陰性對(duì)照品和陽性定量參考品中的一種或多種。