[發(fā)明專利]生姜莖基腐病群結(jié)腐霉的LAMP檢測(cè)引物及檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810752242.4
• 申請(qǐng)日: 2018-07-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108531646A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-09-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姜玉松;任芳新;姜妮;黃孟軍;李洪雷;李哲馨;劉奕清
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 重慶文理學(xué)院
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 重慶晶智匯知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 50229
• 代理人: 李靖

本發(fā)明提供了一種生姜莖基腐病群結(jié)腐霉的LAMP檢測(cè)引物及檢測(cè)方法，包括三引物對(duì)：FIP、BIP；F3、B3；LF、LB；所述檢測(cè)方法如下：反應(yīng)體系為：反應(yīng)總體積25μL，1.2μM FIP和BIP，0.4μM F3和B3，0.4μM LF和LB，2.0mM d NTPs，1.2M betaine，10mM Tris?HCl(pH 8.8)，30mM KCl，5mM(NH₄)₂SO₄，10mM MgSO₄，0.15％Tween?20，10個(gè)單位的Bst 2.0 DNA大片段聚合酶，2.5μL 10×Thermopol反應(yīng)緩沖液，2μL DNA模板和1μL SYBR Green I熒光染料。本發(fā)明建立了一種生姜病原菌田間分子快速診斷方法，有效地指導(dǎo)姜農(nóng)對(duì)癥下藥，減少農(nóng)藥使用量。

【技術(shù)領(lǐng)域】

本發(fā)明具體涉及一種生姜莖基腐病群結(jié)腐霉的LAMP檢測(cè)引物及檢測(cè)方法。

【背景技術(shù)】

生姜是全球重要的辛香蔬菜，是我國(guó)優(yōu)勢(shì)特產(chǎn)蔬菜，單位面積效益居經(jīng)濟(jì)作物前列，已成為我國(guó)鄉(xiāng)村振興、扶貧攻堅(jiān)的特色高效產(chǎn)業(yè)，重慶市七大特色產(chǎn)業(yè)鏈主推作物。然而，生姜田間病害突發(fā)頻發(fā)，給生姜種植產(chǎn)業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。長(zhǎng)江上游高溫高濕、時(shí)晴時(shí)雨的氣候和粘性的土壤適宜生姜病原菌的繁殖、傳播。據(jù)調(diào)查，在每年的6-8月份，姜瘟病、莖基腐病等田間病害進(jìn)入高發(fā)期，常常是一場(chǎng)雨一場(chǎng)病，輕者減產(chǎn)20％-30％，重者可達(dá)80％以上，且一旦大面積發(fā)病，很難采取措施補(bǔ)救，給姜農(nóng)帶來(lái)巨額損失。

現(xiàn)已查明，生姜病害主要有細(xì)菌性病害和真菌性病害，包括姜瘟病青枯菌(R.solanacearum)等4種細(xì)菌性病原菌和莖基腐病群結(jié)腐霉菌(Pythium myriotylum)等10余種真菌性病原菌。生姜病害在發(fā)病初期通常是單一病原菌引起，而病害癥狀顯現(xiàn)后通常會(huì)混合多種病原菌，導(dǎo)致復(fù)合病癥出現(xiàn)，給病原菌診斷帶來(lái)極大的困難。莖腐病是生姜種植業(yè)最具破壞性的病害之一，具有發(fā)病時(shí)間短、病程進(jìn)展快、病株致死率高的特點(diǎn)。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)的飛速發(fā)展，為植物病害的早期檢測(cè)鑒定提供了新的技術(shù)和方法，植物病原菌的診斷技術(shù)己從田間傳統(tǒng)診斷、免疫學(xué)診斷發(fā)展到了以PCR為基礎(chǔ)的植物病原菌的分子檢測(cè)水平，但迄今為止針對(duì)生姜病原菌的田間分子檢測(cè)技術(shù)尚未見(jiàn)到報(bào)到。

【發(fā)明內(nèi)容】

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題之一，在于提供一種群結(jié)腐霉的LAMP檢測(cè)引物。

本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的：一種群結(jié)腐霉的LAMP檢測(cè)引物，其特征在于：包括三引物對(duì)：FIP、BIP；F3、B3；LF、LB；各引物的核苷酸序列如下：

FIP：5′-TCACTGCGTTCGAAAGTCAC-AGAAGACGCGAGTCCCT-3’

BIP：

5′-GATCGCTCTGCGCGAGTGG-CACCCCGTCAGCTGCAAA-3’；

F3：5′-GTGAGGTGTCTCGCTGGGT-3’；

B3：5′-GCCCCACACAAGACAGGTA-3’；

LF：5′-ACAAGAAAGAGCGAACG-3’；

LB：5′-AAGCAACCTCTATTGGCG-3’。

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題之二，在于提供一種群結(jié)腐霉LAMP檢測(cè)方法。

本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的：一種群結(jié)腐霉LAMP檢測(cè)方法，利用權(quán)利要求1所述的LAMP引物進(jìn)行LAMP反應(yīng)，LAMP反應(yīng)體系為：