[發明專利]生姜莖基腐病群結腐霉的LAMP檢測引物及檢測方法

在審

• 申請號: 201810752242.4
• 申請日: 2018-07-10
• 公開（公告）號: CN108531646A
• 公開（公告）日: 2018-09-14
• 發明（設計）人: 姜玉松;任芳新;姜妮;黃孟軍;李洪雷;李哲馨;劉奕清
• 申請（專利權）人: 重慶文理學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 重慶晶智匯知識產權代理事務所(普通合伙) 50229
• 代理人: 李靖

1.一種生姜莖基腐病群結腐霉的LAMP檢測引物，其特征在于：包括三引物對：FIP、BIP；F3、B3；LF、LB；各引物的核苷酸序列如下：

FIP：5′-TCACTGCGTTCGAAAGTCAC-AGAAGACGCGAGTCCCT-3’

BIP：

5′-GATCGCTCTGCGCGAGTGG-CACCCCGTCAGCTGCAAA-3’；

F3∶5′-GTGAGGTGTCTCGCTGGGT-3’；

B3：5′-GCCCCACACAAGACAGGTA-3’；

LF：5′-ACAAGAAAGAGCGAACG-3’；

LB：5′-AAGCAACCTCTATTGGCG-3’。

2.一種生姜莖基腐病群結腐霉LAMP檢測方法，其特征在于：利用權利要求1所述的LAMP引物進行LAMP反應，LAMP反應體系為：

反應總體積25μL，1.2μM FIP和BIP，0.4μM F3和B3，0.4μM LF和LB，2.0mM d NTPs，1.2Mbetaine，10mM Tris-HCl(pH 8.8)，30mM KCl，5mM(NH₄)₂SO₄，10mM MgSO₄，0.15％Tween-20，10個單位的Bst 2.0 DNA大片段聚合酶，2.5μL10×Thermopol反應緩沖液，2μL DNA模板和1μL SYBR Green I熒光染料；

反應條件：反應溫度約為56℃，反應時間30min，最后80℃熱處理10min左右終止反應。