[發明專利]一種重組絨促性素（rhCG）的純化方法

在審

• 申請號: 201810748891.7
• 申請日: 2018-07-10
• 公開（公告）號: CN108503705A
• 公開（公告）日: 2018-09-07
• 發明（設計）人: 羅昊澍;張志學;韓國;師磊
• 申請（專利權）人: 北京偉杰信生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/59
• 分類號: C07K14/59;C07K1/18;C07K1/22;C07K1/20
• 代理公司: 北京旭路知識產權代理有限公司 11567
• 代理人: 董媛;王瑩

本發明公開了一種重組人絨毛膜促性腺激素(rhCG)的純化方法，包括親和層析、疏水層析和陰離子交換層析。經過上述的純化方法，得到的rhCG純度大于98％，且能適合大規模純化rhCG。

技術領域

本發明涉及蛋白質純化領域，特別是重組人絨毛膜促性腺激素(rhCG)的純化。

背景技術

隨著人類文明的不斷進步，環境污染也越來越嚴重，人們在享受物質及精神文明的同時，也不得不收承擔環境污染所帶來的負面影響。環境受到有害物質的污染，使生物包括人在內的生長繁殖受到有害影響，加之遺傳因素的影響，全球患不孕不育的人數越來越多。現今，不孕不育癥已成為一種常見的、多發的、嚴重影響人們生活質量的疾病。防治不孕不育癥已成為臨床上重要的、緊迫的醫療保健問題之一，日益受人類重視。然而目前市場上針對治療不孕不育的藥物相對缺乏，且產量有限。

哺乳動物細胞表達系統能對蛋白進行正確折疊和復雜的糖基化修飾，適合表達復雜高等真核生物蛋白；hCG是一種由人胎盤合體滋養層細胞分泌的糖蛋白激素，包括α和β兩個非共價鍵結合的亞基。理論上用哺乳動物細胞來表達生產生殖激素蛋白，其空間結構和糖基化更接近天然產物，可保證其生理活性。

但是，哺乳細胞在表達rhCG的同時也表達并分泌宿主蛋白和一些副產物蛋白。因此，能否有效且經濟的將rhCG與其他產物分離開來，已經成為下游純化工藝迫在眉睫的任務。

發明內容

本發明的目的旨在解決重組hCG，尤其是哺乳動物細胞表達的rhCG的純化問題，得到純度高、活性高的hCG精純品。

本發明的另一目的是提供一種可適應大規模生產的rhCG純化工藝。

為了達到上述目的，本發明提供了以下的重組hCG純化步驟：

(0)深層過濾；

(1)親和層析；

(2)疏水層析；

(3)陰離子交換層析。

其中，各純化步驟按先后順序進行。

所述的重組hCG純化方法中，純化起始材料為使用哺乳動物細胞-中國倉鼠卵巢細胞(CHO)表達系統表達的發酵液。

所述的重組hCG純化方法中，在親和層析步驟之前，為了去除較大顆粒，以免堵塞柱子，最好進行一次深層過濾步驟。

所述的重組hCG純化方法中，所述的步驟(1)采用一種有配基的染料親和介質，特別優選瓊脂糖親和介質，如藍膠。

所述的重組hCG純化方法中，所述的步驟(1)中，洗脫優選用有弱堿性pH(如在7.5或大約7.5到9.0或大約9.0，或8.0或大約8.0到9.0或大約9.0，最佳8.5或大約8.5)緩沖液。

適合的緩沖液包括Tris-HCl緩沖液，磷酸鹽緩沖液。

最優選pH值為8.5或大約為8.5的Tris-HCl。

所述的重組hCG純化方法中，所述的步驟(1)中，Tris-HCl洗脫緩沖液的濃度較佳為10mM或大約為10mM到100mM或大約為100mM的范圍內；更佳為15mM或大約為15mM到50mM或大約為50mM；最佳在20mM或大約20mM。

所述的重組hCG純化方法中，所述的步驟(2)采用一種苯基瓊脂糖凝膠FF。

所述的重組hCG純化方法中，所述的步驟(2)中，洗脫液應該用磷酸鹽緩沖液或醋酸鈉溶液；特別優選磷酸鹽緩沖液。

所述的重組hCG純化方法中，所述的步驟(2)中，磷酸鹽緩沖液的pH至為6.0或大約6.0到9.0或大約9.0；優選pH值為6.5或大約6.5到8.5或大約8.5；特別優選pH7.0或大約7.0。