[發(fā)明專利]一種快速檢測黃牛ACTL8基因SNP的RFLP方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810736273.0
• 申請日: 2018-07-06
• 公開（公告）號: CN108893545A
• 公開（公告）日: 2018-11-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳宏;蔡翠翠;黃永震;馬云;藍賢勇;雷初朝;白躍宇
• 申請（專利權(quán)）人: 西北農(nóng)林科技大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/683
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11385
• 代理人: 董芙蓉

1.一種快速檢測黃牛ACTL8基因SNP的RFLP方法，其特征在于，包括以下步驟：

以黃牛血液全基因組DNA為模板，在2×Taq PCR MasterMix存在的情況下，利用1對PCR引物，在PCR條件下進行擴增，然后利用限制性內(nèi)切酶對其進行酶切，再通過電泳檢測即能鑒定黃牛ACTL8基因外顯子區(qū)SNP。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測黃牛ACTL8基因SNP的RFLP方法，其特征在于，所述的PCR擴增1對PCR引物包括：

上游引物Forward primer:5'-CCTGGCTCTTCCTGATCCTC-3'和下游引物Reverseprimer:5'-TCCTCCTTCGTCAGCCACTC-3'；

所述的PCR擴增的條件是：12.5μL反應(yīng)體系包括2×Taq PCR MasterMix 6.25μL，ddH₂O4.75μL，100ng黃牛基因組血液DNA，10pmol/μL上、下游引物各0.5μL；

PCR反應(yīng)程序為：95℃預(yù)變性5min；然后94℃變性30s，62.5℃復(fù)性60s，72℃延伸30s，如此進行32個循環(huán)；最后，72℃延伸10min，4℃保存。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的快速檢測黃牛ACTL8基因SNP的RFLP方法，其特征在于，所述的SNP位點為黃牛ACTL8基因第十外顯子第138位核苷酸存在G/A堿基的多態(tài)性。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的快速檢測黃牛ACTL8基因SNP的RFLP方法，其特征在于，所述的限制性內(nèi)切酶為MaeI；10μL MaeI酶切體系包括：1μL含BSA的10×緩沖液，0.2μL的濃度為10U/μL的MaeI限制性內(nèi)切酶，5μL權(quán)利要求2中的PCR產(chǎn)物，3.8μL的滅菌超純水；

酶切消化條件：37℃恒溫箱中消化8～12h。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的快速檢測黃牛ACTL8基因SNP的RFLP方法，其特征在于，所述的電泳檢測是用1.0％～3.0％瓊脂糖凝膠電泳分析限制性內(nèi)切酶MaeI消化PCR擴增片段，G堿基突變表現(xiàn)為：588bp和297bp，A突變表現(xiàn)為：885bp，相應(yīng)地，GG型表現(xiàn)：588bp和297bp；GA型表現(xiàn)：885bp，588bp，297bp；AA型表現(xiàn)：885bp。