[發明專利]一種編碼噬菌體調節蛋白的基因的用途

有效

• 申請號: 201810736140.3
• 申請日: 2018-07-06
• 公開（公告）號: CN109207614B
• 公開（公告）日: 2021-12-07
• 發明（設計）人: 夏雪山;宋玉竹;楊光英
• 申請（專利權）人: 云南科耀生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

本發明提供了一種編碼噬菌體調節蛋白的基因的用途，所述基因為phage?related regulatory protein，所述基因的Genbank登陸號為CP016318.1(751180..752433)，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；本發明通過多重BLAST篩選分析發現基因名為phage?related regulatory protein的艱難梭菌特異性基因，針對該基因設計內外游引物，構建了兩種鑒定體系，優化了反應體系及流程，并進行靈敏度和特異性實驗，證明該基因能有效鑒定或檢測艱難梭菌，靈敏度高，特異性好，操作簡便，具有廣闊的應用前景和市場價值。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種編碼噬菌體調節蛋白的基因的用途。

背景技術

艱難梭菌(Clostridium difficile，C.difficile)，是一種專性厭氧、革蘭染色陽性的粗大芽孢桿菌，大小為0.5-1.9×13.0-16.9μm，沒有鞭毛，芽孢位于菌體次極端呈卵圓形，在外環境可存活數周至數月，具有臭味，廣泛存在于自然環境及動物和人的糞便中，1935年在新生兒腸道正常菌群中被發現，但直到1974年發現本菌與臨床長期使用某些抗生素引起的偽膜性腸炎有關，方被重視。

健康人群中約有3％的人的胃腸道中有艱難梭菌，當抗生素應用或者人體免疫力低下、胃腸功能紊亂的情況下艱難梭菌會大量繁殖，產生A、B毒素侵犯人體結腸引起相關癥狀；艱難梭菌是抗生素相關性腹瀉的重要病原菌，院內感染性腹瀉的最主要原因，偽膜性腸炎90-100％由艱難梭菌引起。艱難梭菌感染(Clostridium difficile infection，CDI)患者臨床表現非特異，輕者自限性腹瀉，重者可出現偽膜性腸炎及中毒性巨結腸。由于近年來抗生素的廣泛應用、壽命的延長、各種生命支持技術的提高，使得艱難梭菌感染率提高，目前全球特別是歐洲和北美艱難梭菌感染的流行暴發迅速增多，嚴重病例數、復發率和病死率均明顯上升，在社區里發病率也逐漸升高，但是由于目前尚無一種敏感性、特異性都較好，而周轉時間短、技術要求不高的診斷方法導致該病的臨床診斷較難。

CN107202834A提供了一種ST37型艱難梭菌及其單位點變異型ST81的鑒定方法，包括以下步驟：提取待鑒定艱難梭菌菌株中的蛋白質，得到質譜測試樣品；利用質譜檢測設備對上述樣品進行檢測，所得質譜圖中在m/z3235～3245和m/z3280～3290處同時存在特異性的蛋白峰的菌株為ST37型艱難梭菌或其單位點變異型ST81。CN103911430A提供了一種艱難梭菌菌株鑒定及毒素基因分析的熒光標記多重PCR檢測試劑盒，該試劑盒包括6對用于檢測艱難梭菌菌株的熒光標記引物，所述特異性引物由艱難梭菌種特異性的磷酸丙糖異構酶(triosephosphateisomerase，tpi)基因、毒素A基因(tcdA)、毒素B(tcdB)，tcdC基因(tcdC)、二元毒素A(cdtA)和二元毒素B(cdtB)的特異性引物組成。擴增結果用毛細管電泳檢測，但上述現有技術實驗步驟繁瑣，檢測基因特異性差，周期漫長，準確度不高。

目前常用于艱難梭菌的檢測方法包括酶聯免疫試驗(EIA)、細胞毒性檢測、大便培養、脫氫酶乳酸檢測、分子生物學檢測方法等，但這些方法都存在一些缺陷。酶聯免疫試驗(EIA)檢測毒素目前仍占臨床實驗室的大部分，直接檢測大便中的A或B毒素，快速，簡單，周期快，敏感性低，有較高的特異性與診斷價值，但是實驗室條件及實驗員要求較高，循環周期長，需要持續的細胞培養。隨著分子生物學和生物信息學的發展，陸續發現了一些病原菌保守的核酸序列，在此基礎上建立了眾多的檢測技術，其中主要有核酸探針檢測技術、實時熒光PCR檢測技術、LAMP和PCR技術，這些方法因其特異性強、靈敏度高、省時等特點已越來越多的被應用于微生物鑒定中。

因此，研發一種特異性良好、靈敏度較好、檢測快速可靠、操作簡單的艱難梭菌的鑒定體系對于提供公共環境的衛生水平具有廣闊的應用前景和巨大的市場價值。

發明內容