[發明專利]一種編碼噬菌體調節蛋白的基因的用途有效
| 申請號： | 201810736140.3 | 申請日： | 2018-07-06 |
| 公開（公告）號： | CN109207614B | 公開（公告）日： | 2021-12-07 |
| 發明（設計）人： | 夏雪山;宋玉竹;楊光英 | 申請（專利權）人： | 云南科耀生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/689 | 分類號： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京品源專利代理有限公司 11332 | 代理人： | 鞏克棟 |
| 地址： | 650000 云南省昆明市昆明經*** | 國省代碼： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 編碼 噬菌體 調節 蛋白 基因 用途 | ||
1.一種編碼噬菌體調節蛋白的基因用于非疾病診斷為目的的鑒定艱難梭菌的用途；
所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一種以非疾病診斷為目的的鑒定艱難梭菌的方法，其特征在于，包括如下步驟：
（1）針對噬菌體調節蛋白的基因設計特異性引物，所述特異性引物包括一對外游引物，所述噬菌體調節蛋白的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
（2）提取待測樣品的模板DNA；
（3）建立PCR鑒定體系，對待測樣品的模板DNA進行檢測。
3.一種以非疾病診斷為目的的鑒定艱難梭菌的方法，其特征在于，包括如下步驟：
（1）針對噬菌體調節蛋白的基因設計特異性引物，所述特異性引物包括一對外游引物和一對內游引物，所述噬菌體調節蛋白的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
（2）提取待測樣品的模板DNA；
（3）建立LAMP鑒定體系，對待測樣品的模板DNA進行檢測。
4.根據權利要求2或3所述的以非疾病診斷為目的的鑒定艱難梭菌的方法，其特征在于，所述外游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2-3所示，所述內游引物的核苷酸序列如SEQID NO.4-5所示。
5.根據權利要求2或3所述的方法，其特征在于，在步驟（1）之前還包括BLAST篩選步驟。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述BLAST篩選包括本地BLAST和在線BLAST。
7.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟（3）所述PCR鑒定體系的反應體系為：10-15μL 2×PCR 預混液，8-12μM的外游引物，40-60 ng基因組DNA。
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述預混液包含DNA聚合酶1-3U，1-3mMMgCl2和180-220μM dNTP。
9.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述PCR鑒定體系的反應條件為：95℃預變性5min；95℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸，35個循環；最后72℃延伸2min。
10.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟（3）所述LAMP鑒定體系的反應體系為：13-17μL2×等溫預混液，6-10μM內游引物，1-3μM外游引物，80-120ng待測樣品DNA。
11.根據權利要求10所述的方法，其特征在于，步驟（3）所述LAMP鑒定體系的反應條件為：63-68℃溫育30min，75-98℃進行退火。
12.一種如權利要求2或3中所述的引物在制備檢測和/或鑒定艱難梭菌試劑盒中的應用。
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