[發(fā)明專利]一種定量檢測(cè)血液中CA153的時(shí)間分辨熒光免疫層析試紙條及制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810732799.1
• 申請(qǐng)日: 2018-07-05
• 公開（公告）號(hào): CN108535485A
• 公開（公告）日: 2018-09-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 常文偉;夏琳;唐盛;劉小平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳市邁科龍生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577
• 代理公司: 深圳市康弘知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44247
• 代理人: 尹彥;胡朝陽

本發(fā)明涉及一種定量檢測(cè)血液中CA153的時(shí)間分辨熒光免疫層析試紙條及其制備方法。該試紙條是在白色PVC底板上依次相互交錯(cuò)2mm粘貼上NC膜、標(biāo)記了CA153抗體和鼠抗兔IgG的熒光微球結(jié)合物墊、樣品墊、吸水墊，然后再用配套的上下兩個(gè)塑料卡殼固定試紙條組裝而成的測(cè)試卡，NC膜上預(yù)包有CA153抗體檢測(cè)線和兔IgG質(zhì)控線，本發(fā)明將時(shí)間分辨熒光免疫層析技術(shù)引入到了血液中CA153的定量檢測(cè)中，不僅大大的節(jié)約了檢測(cè)時(shí)間，提升了檢測(cè)的穩(wěn)定性和靈敏度，而且操作簡便，可用于現(xiàn)場(chǎng)篩查；同時(shí)也具有成本便宜，性價(jià)比高的優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域，特別是涉及一種定量檢測(cè)血液中CA153的時(shí)間分辨熒光免疫層析試紙條及制備方法。

背景技術(shù)

CA15-3是乳腺癌的最重要的特異性標(biāo)志物。30%-50%的乳腺癌患者的CA15-3明顯升高，其含量的變化與治療效果密切相關(guān)，是乳腺癌患者診斷和監(jiān)測(cè)術(shù)后復(fù)發(fā)、觀察療效的最佳指標(biāo)。CA15-3動(dòng)態(tài)測(cè)定有助于II期和III期乳腺癌病人治療后復(fù)發(fā)的早期發(fā)現(xiàn)：當(dāng)CA15-3大于100U/mL時(shí)，可認(rèn)為有轉(zhuǎn)移性病變。患者血清CA15-3水平的消長與乳腺癌病情變化相平行，是復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的重要信號(hào)，而且這種信號(hào)的發(fā)出要比臨床癥狀的出現(xiàn)和用諸如B超、X線或CT等檢出復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的時(shí)間要早。有報(bào)道指出，CA15-3水平超過30U/mL、40U/mL和50U/mL時(shí)，判斷乳腺癌患者存在術(shù)后局部區(qū)域復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，其敏感性均超過90%，特異性分別為95%、99%和100%，正確判斷率分別達(dá)到56%、83%和100%。此外，CA15-3水平增高的乳腺癌患者發(fā)生轉(zhuǎn)移的時(shí)間較CA15-3正常的患者要早許多。據(jù)分析研究，乳腺癌患者血清CA15-3水平變化與其局部淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況之間存在改變的一致性，尤其是有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移灶者，其CA15-3表達(dá)水平及陽性率均顯著增加，所以，CA15-3具有對(duì)乳腺癌轉(zhuǎn)移起監(jiān)視的作用，如其血清水平持續(xù)升高，則應(yīng)開始或加強(qiáng)化療、放療或改用內(nèi)分泌治療等。

目前的血液中CA153的診斷技術(shù)主要包括：酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)（ELISA）、化學(xué)發(fā)光（CLIA）、膠體金免疫層析等方法，但這些方法都有各自的特點(diǎn)及不足：ELISA和化學(xué)發(fā)光以及時(shí)間分辨熒光法原理類似，只在靈敏度方面有差異，目前大都實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化、大批量、定量檢測(cè)，但是存在方法間結(jié)果差異大，線性范圍較窄等缺點(diǎn)，另外，自動(dòng)化檢測(cè)目前由國外大廠商所壟斷，儀器設(shè)備昂貴，并且不適合單人份和較小批量檢測(cè)用，大大限制了它們?cè)诨鶎俞t(yī)院、診所的應(yīng)用，近年來出現(xiàn)了膠體金免疫層析法來檢測(cè)總CA153，快速，便捷，單人份操作，但是缺點(diǎn)是只能實(shí)現(xiàn)半定量，只能指示一個(gè)大概范圍，無法實(shí)現(xiàn)精確定量，而且因?yàn)槟z體金靈敏度的限制，無法檢測(cè)低濃度CA153，異常標(biāo)本需要使用其他方法復(fù)核檢測(cè)，無形中增加了被測(cè)試者的就醫(yī)成本，在市場(chǎng)推廣方面有較大難度，很難大面積使用。

時(shí)間分辨熒光免疫分析（TRFIA）是在傳統(tǒng)熒光分析的基礎(chǔ)上創(chuàng)立的一種新型非放射性免疫分析技術(shù)。TRFIA以含有鑭系稀土元素的納米微球作為標(biāo)記物的，根據(jù)鑭系金屬螯合物熒光持續(xù)時(shí)間長且Stokes位移大，用時(shí)間分辨技術(shù)測(cè)量熒光，有效排除非特異性熒光的干擾，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)和穩(wěn)定性好等特點(diǎn)。與經(jīng)典的時(shí)間分辨熒光免疫分析方法DELFIA法不同，時(shí)間分辨熒光免疫層析技術(shù)采用熒光納米微球作為標(biāo)記物，每個(gè)微球中可包裹成千上萬個(gè)熒光分子，大大提高了標(biāo)記效率，有效的提高了靈敏度；同時(shí)納米熒光微球表面修飾有合適密度的羧基，用于與蛋白或抗體的共價(jià)偶聯(lián)，提高標(biāo)記物的穩(wěn)定性。隨著科技的發(fā)展，即時(shí)診斷領(lǐng)域中的免疫層析技術(shù)，從第一代膠體金、彩色乳膠到第二代熒光微球技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了從定性到定量分析的飛躍。而時(shí)間分辨熒光免疫層析技術(shù)則更進(jìn)一步，提升了檢測(cè)的穩(wěn)定性和靈敏度，而且操作簡便，檢測(cè)時(shí)間短，可用于現(xiàn)場(chǎng)篩查；同時(shí)也具有成本便宜，性價(jià)比高的優(yōu)點(diǎn)。