[發明專利]一種定量檢測血液中CA153的時間分辨熒光免疫層析試紙條及制備方法

在審

• 申請號: 201810732799.1
• 申請日: 2018-07-05
• 公開（公告）號: CN108535485A
• 公開（公告）日: 2018-09-14
• 發明（設計）人: 常文偉;夏琳;唐盛;劉小平
• 申請（專利權）人: 深圳市邁科龍生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 深圳市康弘知識產權代理有限公司 44247
• 代理人: 尹彥;胡朝陽

1.一種定量檢測血液中CA153的時間分辨熒光免疫層析試紙條，其特征在于，包括底板（7）和底板（7）上依次緊密連接的樣品墊（1）、熒光微球結合物墊（2）、反應膜（3）和吸水墊（6），

其中所述底板為PVC底板；所述熒光微球結合物墊上包被有CA153抗體和鼠抗兔IgG抗體；所述反應膜為硝酸維生素（NC）膜，所述NC膜上設有檢測線（4）和質控線（5）；所述檢測線（4）上包被有CA153抗體，所述質控線（5）上包被有兔IgG。

2.根據權利要求1所述的時間分辨熒光免疫層析試紙條，其特征在于，所述樣品墊（1）、熒光微球結合物墊（2）、反應膜（3）和吸水墊（6）在底板（7）按順序排列，其中，所述樣本墊（1）與所述熒光微球結合物墊（2）部分重合，重合部分長度占所述熒光微球結合物墊（2）長度的1/5～1/3；

所述熒光微球結合物墊（2）與反應膜（3）有部分重合，重合部分長度占所述熒光微球結合物墊（2）長度的1/5～1/3；

所述反應膜（3）與吸水墊（6）有部分重合，重合部分長度占所述熒光微球結合物墊（2）長度的1/10～1/5；

所述檢測線（4）和質控線（5）的長度占所述反應膜（3）長度的1/15～1/10；

所述檢測線（4）和樣本墊（1）的距離占所述反應膜（3）長度的1/4～1/3；

所述檢測線（4）和質控線（5）之間的間距占所述反應膜的1/3～1/2。

3.根據權利要求1所述的時間分辨熒光免疫層析試紙條，其特征在于，所述CA153抗體的終濃度為0.05～0.5mg/mL，優選為0.1～0.3mg/mL；所述鼠抗兔IgG抗體的終濃度0.05～0.5mg/mL，優選為0.1～0.3mg/mL。

4.根據權利要求1所述的時間分辨熒光免疫層析試紙條，其特征在于，所述熒光微球的直徑為50～500nm，優選地為100～300nm，更優選為200nm。

5.根據權利要求1-4任一所述的時間分辨熒光免疫層析試紙條，其特征在于，所述熒光微球載有鑭系元素或其螯合物，所述鑭系元素優選為釤、銪或鋱。

6.權利要求1-5任一所述的時間分辨熒光免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

A、結合物墊的處理：用定量噴液裝置將結合物墊處理液以16μL/cm的量噴涂于結合物墊上后45℃烘干24小時；

B、NC膜的制備：使用包被緩沖液分別將抗CA153包被抗體以及兔IgG稀釋到0.8mg/mL和1.0mg/mL濃度，使用定量噴液裝置分別將兩者以0.5-0.8cm的間隔噴印于硝酸纖維素膜上，后于45℃烘干72小時，加入干燥劑封存備用；

C、結合物墊的制備：選用直徑為200nm的乳膠微球，使用碳二亞胺（EDC）共價偶聯的方式將CA153抗體和鼠抗兔IgG標記到乳膠微球上；將制備好的乳膠微球使用定量噴液裝置以8μL/cm的量噴涂于處理過的結合物墊上；

D、試紙條的組裝：在白色PVC底板上依次相互交錯2mm地貼上NC膜、結合物墊、樣品墊、吸水墊，即得到時間分辨熒光免疫層析試紙條。

7.根據權利要求6所述的時間分辨熒光免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于，所述步驟C中將CA153抗體和鼠抗兔IgG標記到乳膠微球上的步驟為：使用含有0.05mol/L的 MES緩沖液洗滌乳膠微球，加入EDC和NHS使終濃度為分別為0.5mg/mL和5mg/mL，超聲混勻置搖床避光孵育15min，離心20min去上清，用MES洗滌兩次后加入抗體，使得抗體終濃度為0.2mg/mL，置于搖床避光孵育3h，加入30％封閉液，置于搖床避光孵育1.5h，封閉完成后去上清，用MES洗滌兩次，0.05% Tween-20，0.1%酪蛋白和0.5％BSA的50mmolTris-Hcl pH8.2的保存緩沖液，復溶乳膠微球，4℃保存備用；使用同樣的方法將鼠抗兔IgG標記到乳膠微球上，后用結合物稀釋液以1:10-1:15的比例將標記好的CA153和鼠抗兔IgG抗體稀釋。