[發明專利]一種以含萘雨水為底物的降解菌的篩選方法

在審

• 申請號: 201810732738.5
• 申請日: 2018-07-05
• 公開（公告）號: CN108823142A
• 公開（公告）日: 2018-11-16
• 發明（設計）人: 范曉丹;吳靜;張襄楷
• 申請（專利權）人: 天津城建大學
• 主分類號: C12N1/36
• 分類號: C12N1/36;C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201
• 代理人: 張宏祥

本發明公開來了一種以含萘雨水為底物的降解菌的篩選方法：(1)采用逐步提高萘濃度的方法對以含萘雨水為底物的活性污泥進行梯度馴化：(2)取馴化的活性污泥稀釋10²～10⁵倍，涂布于固體培養基上，置于恒溫培養箱中培養1～4天，挑取數量最多的菌落，劃線分離純化；(3)挑取直徑為4mm范圍內純化優勢菌落或單菌落置于250mL液體培養基中富集培養3天，得到以含萘雨水為唯一碳源的降解菌株。本發明根據污水處理廠剩余污泥中富含降解菌的特點，以馴化替代初期富集培養，既節省了分篩培養的過程，簡化了篩選流程，同時也顯著降低了降解菌的篩選成本，為開發多環芳烴污染處理用微生物資源提供了新途徑。

技術領域

本發明是關于城區雨水處理的，尤其涉及一種從活性污泥中篩選含萘雨水為底物的一種降解菌的方法。

背景技術

城區雨水污染主要是由于屋面徑流、路面徑流、城市綠地、以及降雨時沖刷大氣中的污染物引起的。雨水中以多環芳烴以為主，其含量往往高于國家規定的安全標準，因而在一些缺水地區，雨水中多環芳烴的去除對于雨水的回用尤為必要。多環芳烴被吸入人體后，可以致癌、致畸和致突變性。如果水體中含有大量的多環芳烴，會造成水域生物中毒死亡，會破壞水域生態系統。多環芳烴的攝入還與艾滋病及其它癌癥的發病機制有著緊密的聯系。多環芳烴不僅在外界環境中存在，還可以遷移、轉化進入植物體內并大量富集，嚴重影響農產品質量，從而危害人類健康。多環芳烴在水中的溶度解與多環芳烴的苯環數成反比，因此城區雨水中低環萘的含量較高，萘在250C下溶解度為30mg/L，易溶于乙醇、醚和苯，具有半揮發性，高濃度會導致人體溶血性貧血及肝、腎損害。美國環保局在20世紀80年代已將16種不帶分支的PAHs(多環芳烴)列入優先污染物名單中，我國也將其列入環境污染物的黑名單中?？梢?，國內外學者對雨水中多環芳烴的關注，逐漸成為研究的熱點。

目前對于萘的降解有物理法，化學法、植物法和生物法，但最常用的是生物法，微生物修復技術能有效的去除污染土壤中的含苯環少的PAHs，具有環保高效廉價的特點。微生物降解萘主要有兩種方式，一是以萘為唯一碳源，二是萘與其他有機質進行共代謝。許多研究都是從受多環芳烴污染的土壤中篩選萘的降解菌，迄今為止，學者們已經分離出幾種典型可以降解萘的細菌，主要有反硝化產堿菌(Alcaligenes denitrificans)、分支桿菌(Mycobacterium sp.)、惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida)、黃桿菌、泡馕假單胞菌(Pseudomonas vesicularis)、熒光假單胞菌(Pseudomonas fluorescens)、紅球菌(Rhodococcus sp.)和莫拉氏菌(Moraxella sp.)等。。本發明為從活性污泥中快速篩選含萘雨水降解菌，為開發多環芳烴污染處理用微生物資源提供新途徑，促進雨水的高質量回用

發明內容

本發明的目的，是在現有技術的基礎上，為開發多環芳烴污染處理用微生物資源提供新的途徑，提供一種從活性污泥中快速篩選含萘雨水降解菌的篩選方法，以利于城區雨水的高質量回用。

本發明通過如下技術方案予以實現。

一種以含萘雨水為底物的降解菌的篩選方法，具有如下步驟：

(1)梯度馴化

采用逐步提高萘濃度的方法對以含萘雨水為底物的活性污泥進行梯度馴化：

將沉降比為20％的活性污泥與取自瀝青路面的地表徑流雨水按質量比1:2混合，馴化期內，在雨水中首次加入萘的量為5mg/L，再將雨水與營養物質按體積比1:1混合；采用每隔2天排水1次，每次排100mL，同時進100mL含萘雨水，而后營養物質每天減少10％，10天后降為0，不再加營養物質，再每隔6天增加雨水中萘的濃度，每次增加的梯度為5mg/L，30天后增加到30mg/L為止；

(2)分離純化