[發明專利]一種HPV16 L1抗體的ELISA檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201810731308.1
• 申請日: 2018-07-05
• 公開（公告）號: CN108872596A
• 公開（公告）日: 2018-11-23
• 發明（設計）人: 饒敏;魏勇;姚靜
• 申請（專利權）人: 重慶巴而思生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/574;G01N33/535;G01N33/543
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所 11308
• 代理人: 黎昌莉

1.一種用于HPV16 L1抗體檢測的ELISA試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：酶標板、辣根過氧化酶標記的二抗；所述酶標板的反應孔包被有HPV16 L1重組蛋白；

所述酶標板包括具有石墨烯導電層的酶標板主體、用于控制所述石墨烯導電層溫度的控溫裝置及與控溫裝置電性連接的電源裝置；

所述控溫裝置包括溫度檢測模塊和控制模塊；

所述溫度檢測模塊用于檢測石墨烯層的實時溫度數據，并將所述實時溫度數據傳遞至所述控制模塊；

所述控制模塊用于設置對溫度的控制指令，以及接收所述溫度檢測模塊的實時溫度數據，并根據所述控制指令和所述實時溫度數據提取相應的控制命令，所述控制命令用于控制所述石墨烯導電層加熱或者停止加熱，以使所述實時溫度數據與所述控制指令對應的溫度數據相匹配；

所述HPV16 L1重組蛋白包括HPV16 L1蛋白的全長序列。

2.根據權利要求1所述的ELISA試劑盒，其特征在于，所述HPV16 L1重組蛋白為大腸桿菌表達的HPV16 L1重組蛋白。

3.根據權利要求1所述的ELISA試劑盒，其特征在于，所述酶標板為可拆卸酶標板，包含多個包被有所述HPV16 L1重組蛋白的酶標條。

4.根據權利要求1所述的ELISA試劑盒，其特征在于，所述酶標板為96孔酶標板。

5.根據權利要求1所述的ELISA試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包含樣品稀釋緩沖液；

所述樣品樣品稀釋緩沖液的制備：BSA 1g,NaCl 0.8g，KH₂PO₄ 0.02g，Na₂HPO₄.12H₂O0.29g，KCl 0.02g，Proclin 300 0.01g，加雙蒸水至100ml，調至pH 7.4。

6.根據權利要求1所述的ELISA試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包含TMB底物液和終止液；

所述TMB底物液為單組份顯色液；

所述底物液：TMB 20mg，無水乙醇10ml，加雙蒸水至100ml；

所述終止液為2mol/L H₂SO₄的水溶液。

7.根據權利要求1所述的ELISA試劑盒，其特征在于，所述石墨烯導電層位于所述酶標板主體的內表面。

8.根據權利要求1所述的ELISA試劑盒，其特征在于，所述ELISA試劑盒用于雞HPV L1抗體檢測時，所述辣根過氧化酶標記的二抗為辣根過氧化酶標記的抗雞抗體。

9.根據權利要求1所述的ELISA試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包含陰性對照和陽性對照，所述陰性對照為蒸餾水或PBS溶液，所述陽性對照為HPV L1抗體。

10.權利要求1所述ELISA試劑盒用于檢測HPV L1抗體的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)將所述ELISA試劑盒接通電源，設置所述控溫裝置的控制溫度為37℃；并設置空白組、陰性對照組和實驗組；

2)加樣品：設置合理的濃度梯度，用PBS溶液稀釋待檢樣品，將稀釋后的待檢樣品加入所述酶標板的實驗組反應孔中，陰性對照組加PBS溶液，保溫反應后，PBST溶液洗滌；

3)加二抗：向所述陰性對照組和實驗組的反應孔中加入所述辣根過氧化酶標記的二抗，保溫反應后，PBST溶液洗滌；

4)顯色：每反應孔加入TMB-過氧化氫尿素溶液，避光保溫反應，后加入2mol/L H₂SO₄的水溶液；

5)結果檢測：加入2mol/L H₂SO₄的水溶液的15min內，用450nm波長檢測結果，計算HPVL1抗體的效價。