[發(fā)明專利]一種快速檢測稻谷中兩種稻曲毒素的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810726387.7
• 申請日: 2018-07-04
• 公開（公告）號: CN108982689A
• 公開（公告）日: 2018-12-11
• 發(fā)明（設計）人: 段勁生;董旭;孫明娜;劉琴芳;褚玥;王梅;高同春
• 申請（專利權）人: 安徽省農業(yè)科學院植物保護與農產品質量安全研究所;安徽省食品藥品檢驗研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京兆君聯(lián)合知識產權代理事務所(普通合伙) 11333
• 代理人: 鄭學成

本發(fā)明公開了一種快速檢測稻谷中兩種稻曲毒素的方法，包括如下步驟：選取粉碎稻谷樣品，并將粉碎稻谷樣品置于離心管中，加酸性水溶液高速勻漿提取后，高速離心處理，取上清液，殘渣再加酸性水溶液高速勻漿均質提取，再次高速離心，合并上清液于濃縮瓶中，濃縮后，待凈化，將處理后的上清液置于C18固相萃取柱內，依次用甲醇、超純水活化，上清液用甲醇以及水混合溶液洗脫，濃縮近干，然后再次利用甲醇與甲酸水混合溶液定容，過濾膜，將凈化后的稻谷樣品進行超高效液相色譜串聯(lián)質譜分析本發(fā)明的目的是提供一種簡單、快速、經濟、靈敏、安全。

技術領域

本發(fā)明涉及檢測技術領域，尤其涉及一種快速檢測稻谷中兩種稻曲毒素的方法。

背景技術

水稻原產我國，已有七千年多年的種植歷史，我國是世界上最大的水稻生產國和消費國，水稻是國民重要主糧之一。我國稻區(qū)遼闊，除青海省外，其余各省均有種植水稻。稻曲病是由綠核菌侵染水稻穗部而引起的一種真菌性病害，侵染后除危害自身谷粒外，還致使病穗空秕率增多，千粒重降低，導致減產欠收，直接影響水稻產量和質量，產生的稻曲毒素對人畜均有毒害作用，其中稻曲毒素A的含量最高且活性最大，其次是稻曲毒素B。目前的檢測方法主要為有機試劑提取后，通過液相色譜法、液相色譜質聯(lián)用法、液相色譜高分辨質譜法等，對稻曲毒素進行檢測分析，目前的方法存在前處理時間長、試劑消耗大、重復性差、部分設備昂貴不利于實施的缺點。為此，我們提出了一種快速檢測稻谷中兩種稻曲毒素的方法。

發(fā)明內容

本發(fā)明提出了一種快速檢測稻谷中兩種稻曲毒素的方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

本發(fā)明提出了一種快速檢測稻谷中兩種稻曲毒素的方法，包括如下步驟：

S1：標準樣品溶液制備：選取稻曲毒素A以及稻曲毒素B，分別用超純水將稻曲毒素A以及稻曲毒素B稀釋為質量濃度為0.005mg/L、0.01mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L的標準溶液；

S2：樣品的提取：選取粉碎稻谷樣品，并將粉碎稻谷樣品置于離心管中，加酸性水溶液高速勻漿提取后，高速離心處理，取上清液，殘渣再加酸性水溶液高速勻漿均質提取，再次高速離心，合并上清液于濃縮瓶中，濃縮后，待凈化；

S3：樣品的凈化：將S2中處理后的上清液置于C18固相萃取柱內，依次用甲醇、超純水活化，上清液用甲醇以及水混合溶液洗脫，濃縮近干，然后再次利用甲醇與甲酸水混合溶液定容，過濾膜，完成后待測；

S4：將S3中凈化后的稻谷樣品進行超高效液相色譜串聯(lián)質譜分析，具體步驟如下；

(1)、選取一支色譜柱，并向其中注入A、B混合流動相，且A相具體為水，所述水內含有甲酸，B相具體為色譜級甲醇，A、B混合流動相以梯度洗脫方式，按0.1-0.4ml/min的流速進入色譜柱內，分析時間5分鐘，能夠保證目標物和雜質充分分離；

(2)、上述完成后，再次對其置于三重四級桿式質譜儀內，以高能電子流轟擊樣本，使該樣本失去電子變?yōu)閹д姾傻姆肿与x子和碎片離子，通過霧化器、干燥氣以及碰撞氣對分子離子進行質譜優(yōu)化處理，且霧化器氣流為1.5-3L/min，干燥氣氣流為15-20L/min，碰撞氣為200-230Kpa；

S5：添加一定濃度標準溶液至粉碎的空白稻谷樣品內，得到添加回收樣品，將添加回收樣品、待測樣品均按照S2、S3以及S4對樣本進行處理，以S1中配制的0.005mg/L、0.01mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L六個濃度為標準工作曲線，然后進行LC-MSMS分析分別得到相應峰面積，將添加回收樣品和待測樣品峰面積帶入標準工作曲線方程，計算稻曲毒素A以及稻曲毒素B的添加回收率和變異系數(shù)，并得到待測樣品中的毒素含量，即完成稻谷中稻曲毒素的檢測。

優(yōu)選的，在S2中稱取稻谷樣品量為10-20g，兩次分別加入20-30ml酸性水溶液。