[發明專利]一種快速檢測稻谷中兩種稻曲毒素的方法

在審

• 申請號: 201810726387.7
• 申請日: 2018-07-04
• 公開（公告）號: CN108982689A
• 公開（公告）日: 2018-12-11
• 發明（設計）人: 段勁生;董旭;孫明娜;劉琴芳;褚玥;王梅;高同春
• 申請（專利權）人: 安徽省農業科學院植物保護與農產品質量安全研究所;安徽省食品藥品檢驗研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京兆君聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 11333
• 代理人: 鄭學成

1.一種快速檢測稻谷中兩種稻曲毒素的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1：標準樣品溶液制備：選取稻曲毒素A以及稻曲毒素B，分別用超純水將稻曲毒素A以及稻曲毒素B稀釋為質量濃度為0.005mg/L、0.01mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L的標準溶液；

S2：樣品的提取：選取粉碎稻谷樣品，并將粉碎稻谷樣品置于離心管中，加酸性水溶液高速勻漿提取后，高速離心處理，取上清液，殘渣再加酸性水溶液高速勻漿均質提取，再次高速離心，合并上清液于濃縮瓶中，濃縮后，待凈化；

S3：樣品的凈化：將S2中處理后的上清液置于C18固相萃取柱內，依次用甲醇、超純水活化，上清液用甲醇以及水混合溶液洗脫，濃縮近干，然后再次利用甲醇與甲酸水混合溶液定容，過濾膜，完成后待測；

S4：將S3中凈化后的稻谷樣品進行超高效液相色譜串聯質譜分析，具體步驟如下；

(1)、選取一支色譜柱，并向其中注入A、B混合流動相，且A相具體為水，所述水內含有甲酸，B相具體為色譜級甲醇，A、B混合流動相以梯度洗脫方式，按0.1-0.4ml/min的流速進入色譜柱內，分析時間5分鐘，能夠保證目標物和雜質充分分離；

(2)、上述完成后，再次對其置于三重四級桿式質譜儀內，以高能電子流轟擊樣本，使該樣本失去電子變為帶正電荷的分子離子和碎片離子，通過霧化器、干燥氣以及碰撞氣對分子離子進行質譜優化處理，且霧化器氣流為1.5-3L/min，干燥氣氣流為15-20L/min，碰撞氣為200-230Kpa；

S5：添加一定濃度標準溶液至粉碎的空白稻谷樣品內，得到添加回收樣品，將添加回收樣品、待測樣品均按照S2、S3以及S4對樣本進行處理，以S1中配制的0.005mg/L、0.01mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L六個濃度為標準工作曲線，然后進行LC-MSMS分析分別得到相應峰面積，將添加回收樣品和待測樣品峰面積帶入標準工作曲線方程，計算稻曲毒素A以及稻曲毒素B的添加回收率和變異系數，并得到待測樣品中的毒素含量，即完成稻谷中稻曲毒素的檢測。

2.根據權利要求1所述的一種快速檢測稻谷中兩種稻曲毒素的方法，其特征在于：在S2中稱取稻谷樣品量為10-20g，兩次分別加入20-30ml酸性水溶液。

3.根據權利要求1所述的一種快速檢測稻谷中兩種稻曲毒素的方法，其特征在于：樣品提取的酸性水溶液pH＝3-5，若是不處在該區域，則使用甲酸進行調節。

4.根據權利要求1所述的一種快速檢測稻谷中兩種稻曲毒素的方法，其特征在于：在S2中離心處理中，高速勻漿轉速為10000-12000rpm，且時間為2min。

5.根據權利要求1所述的一種快速檢測稻谷中兩種稻曲毒素的方法，其特征在于：在S3中的甲醇以及水的體積比為5：5-8：2。

6.根據權利要求1所述的一種快速檢測稻谷中兩種稻曲毒素的方法，其特征在于：在進行超高效液相色譜串聯質譜分析中，A相的水中甲酸的含量為0.1-0.2％。

7.根據權利要求1所述的一種快速檢測稻谷中兩種稻曲毒素的方法，其特征在于：所述色譜柱的柱溫均為30-40攝氏度。

8.根據權利要求1所述的一種快速檢測稻谷中兩種稻曲毒素的方法，其特征在于：所述色譜柱具體為島津Shim-pack XR-C8，規格2.0×100mm，粒徑1.6μm，進樣量10μl。