[發明專利]一種用于檢測四種常見根結線蟲的RPA引物、試劑盒及檢測方法有效
| 申請號： | 201810726124.6 | 申請日： | 2018-07-04 |
| 公開（公告）號： | CN108559783B | 公開（公告）日： | 2022-04-15 |
| 發明（設計）人： | 鞠玉亮;操海群;潘月敏;林宇;吳慧平 | 申請（專利權）人： | 安徽農業大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6888 | 分類號： | C12Q1/6888;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245 | 代理人： | 尹明明 |
| 地址： | 230036 安徽省*** | 國省代碼： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 用于 檢測 常見 線蟲 rpa 引物 試劑盒 方法 | ||
1.一種用于檢測四種常見根結線蟲的RPA引物組，其特征在于：
所述的RPA引物組為如下四組所示，
用于檢測南方根結線蟲的RPA引物對：
（A）SEQ ID No：1和SEQ ID No：2；
用于檢測爪哇根結線蟲的RPA引物對：
（B）SEQ ID No：3和SEQ ID No：4；
用于檢測花生根結線蟲的RPA引物對：
（C）SEQ ID No：5和SEQ ID No：6；
和用于檢測象耳豆根結線蟲的RPA引物對：
（D）SEQ ID No：7和SEQ ID No：8。
2.一種含有權利要求1所述的RPA引物組用于檢測四種常見根結線蟲的試劑盒。
3.一種用于檢測四種常見根結線蟲的檢測方法，其特征在于：
包括以下步驟：
（1）提取樣品中的DNA；
（2）以步驟（1）提取的DNA作為待檢測DNA模板，采用權利要求1所述的RPA引物組進行RPA擴增反應；
（3）分析RPA擴增產物。
4.根據權利要求3所述的用于檢測四種常見根結線蟲的檢測方法，其特征在于：步驟（2）中RPA擴增反應的反應體系以50μL計為：
待檢測DNA模板 1.0μL
10μmol/L 權利要求1所述的RPA引物組的上游引物 2.1μL
10μmol/L 權利要求1所述的RPA引物組的下游引物 2.1μL
反應緩沖液 29.5μL
RPA凍干粉 5.0mg
280mmol/L醋酸鎂 2.5μL
ddH2O 補足至50μL。
5.根據權利要求3所述的用于檢測四種常見根結線蟲的檢測方法，其特征在于：步驟（2）中RPA擴增反應的反應條件為：37℃-45℃下反應20min，隨后冰上終止反應。
6.根據權利要求3-5任意一項所述的用于檢測四種常見根結線蟲的檢測方法，其特征在于：步驟（3）中分析RPA擴增產物的方法為利用瓊脂糖凝膠電泳技術分析。
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