[發明專利]HMGB1檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201810721943.1
• 申請日: 2018-07-04
• 公開（公告）號: CN109030817A
• 公開（公告）日: 2018-12-18
• 發明（設計）人: 郭凡財;趙洪斌;郭飛;余鵬;李曉暉;歐陽冬生
• 申請（專利權）人: 長沙都正醫學檢驗有限責任公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/558
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 黃曉慶

本發明涉及一種HMGB1檢測試劑盒及其制備方法，其中，HMGB1檢測試劑盒包括：試劑1和試劑2；所述試劑1包括HMGB1抗體標記的膠乳微球、助懸劑、牛血清白蛋白、第一緩沖液；所述試劑2包括氯化鈉、分散劑、表面活性劑、第二緩沖液。該HMGB1檢測試劑盒是一種基于膠乳增強免疫比濁法檢測HMGB1的試劑盒，使用時通過在均相反應體系中進行抗原、抗體反應，當抗原與抗體結合后，直接測定反應溶液的吸光度值來反應被測抗原的濃度，檢測速度快、成本低、省時省力，且穩定性和重復性好，能較真實地反映被測物質的含量。

技術領域

本發明涉及醫學檢測技術領域，特別是涉及一種HMGB1檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

高遷移率族蛋白1(high mobility group protein，HMGB1)是存在于真核細胞核內的非組蛋白染色體結合蛋白，因其在聚丙烯酞胺凝膠電泳(PAGE)中遷移速度快而得名。HMGB1普遍存在于哺乳動物組織細胞中，是具有重要意義的炎癥因子。HMGB1作為晚期炎癥因子，相對于早期炎癥因子在較長時間表達穩定，能夠更好的反應體內炎癥發生的情況，對臨床治療方案的確定具有更加重要的意義。

大量研究表明，在由細菌感染引起的炎癥(例如內毒素血癥和膿毒癥，特別是急性炎癥)中，早期炎癥因子(例如TNF)刺激相關細胞(例如巨噬細胞)，開始分泌HMGB1，在一定時間后(例如18h)達到峰值。急性炎癥經過治療后，早期炎癥因子回復到正常水平，若治療效果不佳，晚期炎癥因子(HMGB1)將會產生。隨時監測晚期炎癥因子，判斷治療效果，指導用藥，及早采取措施，減少炎癥對身體的傷害極為重要。

HMGB1檢測運用非常廣泛，但目前已有的方法由于操作時間長或靈敏度問題，不適于臨床檢驗項目的開展。目前，市面上HMGB1檢測主要采用ELISA法(酶聯免疫吸附測定，enzyme linked immunosorbent assay)，其操作繁瑣、耗時。而且，國產HMGB1ELISA檢測試劑盒質量參差不齊，而進口試劑一般價格昂貴。因此，亟需一種成本低，檢測速度快，適合臨床樣本檢測項目的技術出現。

發明內容

基于此，有必要提供一種檢測速度快、成本低的HMGB1檢測試劑盒。

一種HMGB1檢測試劑盒，包括：試劑1和試劑2；

所述試劑1包括HMGB1抗體標記的膠乳微球、助懸劑、牛血清白蛋白和第一緩沖液；

所述試劑2包括氯化鈉、分散劑、表面活性劑和第二緩沖液。

采用上述HMGB1檢測試劑盒進行檢測時，取試劑1和試劑2混合，然后加入待測樣品，通過在均相反應體系中進行抗原、抗體反應，并測定反應溶液的吸光度值來反應被測HMGB1的濃度。其通過在膠乳微球表面交聯HMGB1抗體，當抗原與交聯有HMGB1抗體的膠乳微球結合后，能夠在短時間內迅速聚集在一起，從而改變反應溶液的吸光度，通過直接測定反應溶液的吸光度值來反應被測抗原的濃度，相較于ELISA法，省卻了ELISA法反復孵育和洗板等繁瑣操作步驟，幾分鐘就能獲得結果，省時省力；并且，操作步驟的簡化也相應地避免了繁瑣的人為操作因素和試劑、環境等外界因素的干擾，穩定性和重復性都較好，能較真實地反映被測物質的含量。

而且，通過將HMGB1抗體標記在膠乳顆粒上，在保證抗體與抗原特異性結合的條件下，還提高試劑檢測的敏感性。

在其中一個實施例中，所述試劑1包括以下終濃度的組分：60μg/mL～120μg/mLHMGB1抗體、0.1v/v％～0.15v/v％膠乳微球、30g/L～60g/L助懸劑、5g/L～20g/L牛血清白蛋白和40mM/mL～60mM/mL第一緩沖液，所述試劑1的pH值為7～8。

在其中一個實施例中，所述膠乳微球為表面活化的聚苯乙烯膠乳微球，所述聚苯乙烯膠乳微球的表面活化基團為羧基，所述膠乳微球的顆粒直徑為20nm～50nm。