[發明專利]HMGB1檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201810721943.1
• 申請日: 2018-07-04
• 公開（公告）號: CN109030817A
• 公開（公告）日: 2018-12-18
• 發明（設計）人: 郭凡財;趙洪斌;郭飛;余鵬;李曉暉;歐陽冬生
• 申請（專利權）人: 長沙都正醫學檢驗有限責任公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/558
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 黃曉慶

1.一種HMGB1檢測試劑盒，其特征在于，包括試劑1和試劑2；所述試劑1包括HMGB1抗體標記的膠乳微球、助懸劑、牛血清白蛋白和第一緩沖液；

所述試劑2包括氯化鈉、分散劑、表面活性劑和第二緩沖液。

2.根據權利要求1所述的HMGB1檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑1包括以下終濃度的組分：60μg/mL～120μg/mL HMGB1抗體、0.1v/v％～0.15v/v％膠乳微球、30g/L～60g/L助懸劑、5g/L～20g/L牛血清白蛋白和40mM/mL～60mM/mL第一緩沖液，所述試劑1的pH值為7～8。

3.根據權利要求1所述的HMGB1檢測試劑盒，其特征在于，所述膠乳微球為表面活化的聚苯乙烯膠乳微球，所述聚苯乙烯膠乳微球的表面活化基團為羧基，所述膠乳微球的顆粒直徑為20nm～50nm。

4.根據權利要求1所述的HMGB1檢測試劑盒，其特征在于，所述助懸劑選自海藻糖、葡萄糖、乳糖和蔗糖中的至少一種。

5.根據權利要求1所述的HMGB1檢測試劑盒，其特征在于，所述第一緩沖液選自PB緩沖液、MES緩沖液、Tris-HCl緩沖液和甘氨酸緩沖液中的至少一種。

6.根據權利要求1～5任一所述的HMGB1檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑2包括以下終濃度的組分：5g/L～9g/L氯化鈉、5g/L～10g/L分散劑、0.2g/L～0.8g/L表面活性劑和40mM/mL～60mM/mL第二緩沖液，所述試劑2的pH值為7～8。

7.根據權利要求6所述的HMGB1檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑1和所述試劑2的用量體積比為1:(1～3)。

8.權利要求1～7任一所述的HMGB1檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，包括所述試劑1的制備步驟和所述試劑2的制備步驟；

其中，所述試劑1的制備步驟包括以下步驟：

將所述助懸劑、所述牛血清白蛋白、所述第一緩沖液和所述HMGB1抗體標記的膠乳微球混合，并超聲懸浮，得超聲懸浮液；

將所述超聲懸浮液進行紫外滅菌、無菌封裝，得到所述試劑1；

所述試劑2的制備步驟：

將所述試劑2的各組分混合均勻，得到所述試劑2。

9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述試劑1的制備步驟還包括所述HMGB1抗體標記的膠乳微球的制備，包括如下步驟：

取膠乳微球加入到緩沖液中，然后加入表面活性劑和活化劑，活化所述膠乳微球，制成混合液A；所述活化劑為羧基活化劑或氨基活化劑；

往所述混合液A中加入HMGB1抗體，進行偶聯標記反應，制成含HMGB1抗體標記的膠乳微球的溶液B；

往所述溶液B中加入封閉液，封閉反應完成后，進行離心，所得沉淀即為所述HMGB1抗體標記的膠乳微球。

10.根據權利要求9所述的制備方法，其特征在于，所述試劑1的制備方法中的所述表面活性劑選自TritonX-100、吐溫-20和脂肪酸甲酯磺酸鈉中的至少一種。