[發明專利]檢測鼻腔脫落細胞中CLC基因表達量的方法及應用

在審

• 申請號: 201810719334.2
• 申請日: 2018-07-03
• 公開（公告）號: CN108977510A
• 公開（公告）日: 2018-12-11
• 發明（設計）人: 張羅;王成碩;閆冰;劉暢
• 申請（專利權）人: 張羅;王成碩;閆冰;北京市耳鼻咽喉科研究所;首都醫科大學附屬北京同仁醫院
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851;C12Q1/6883
• 代理公司: 北京智匯東方知識產權代理事務所(普通合伙) 11391
• 代理人: 康正德;陳智勇

本發明提出一種檢測鼻腔脫落細胞中CLC基因表達量的非診斷目的的方法及應用，包括以下步驟：從鼻腔脫落細胞中提取RNA，將總RNA逆轉錄為cDNA，采用定量聚合酶鏈反應將cDNA中的CLC基因和內參基因分別采用CLC基因的特異性引物和內參基因的特異性引物進行實時熒光定量PCR擴增，基于擴增產物的檢測結果計算CLC基因表達量。本發明方法，以有效篩選的CLC基因作為生物標志物，提供對其基因表達量的檢測方法，實現對鼻腔脫落細胞中CLC基因表達量的計算，能夠有效獲取CLC基因表達量，且提供的方法簡單快捷，敏感性高，重復性好，適宜廣泛推廣應用。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，尤其涉及一種檢測鼻腔脫落細胞中CLC基因表達量的方法。

背景技術

慢性鼻竇炎伴鼻息肉(Chronic rhinosinusitis with nasal polyps，CRSwNP)是鼻竇黏膜的慢性炎癥，查體可見鼻腔或中鼻道息肉形成。CRSwNP常見癥狀為鼻堵、流涕或鼻涕倒流、嗅覺減退、面部悶脹感或壓力感，持續時間超過12周。患病率約為0.5-4％，CRSwNP常伴有哮喘和過敏性鼻炎，有報道7％的哮喘患者患有CRSwNP，而26-48％的CRSwNP患有哮喘。CRSwNP發病機制目前還不確定，黏膜上皮細胞破壞、宿主免疫系統失衡和病原微生物入侵可能是其發病的主要原因。CRSwNP主要的治療方式是手術和藥物治療。但研究表明，即使通過規范的藥物或手術治療，慢性鼻竇炎伴鼻息肉的復發率仍高達56％，嚴重影響患者生活質量，同時帶來高額醫療支出，但臨床卻缺乏根治性治療方法，因而成為鼻科學研究領域的重點。

依據嗜酸性粒細胞浸潤的程度可以將CRSwNP分為嗜酸性粒細胞型(EosinophilicCRSwNP，ECRSwNP)與非嗜酸性粒細胞型(Noneosinophilic CRSwNP，nonECRSwNP)，二者的臨床表現、用藥和預后均不同，嗜酸性粒細胞型的臨床癥狀較重，以鼻堵和嗅覺減退為主，多合并有哮喘，術后復發率較高。鼻息肉組織中嗜酸性粒細胞浸潤程度與復發關系最為密切，當組織中該細胞百分比超過27％時，復發風險超過90％。嗜酸性粒細胞型息肉對糖皮質激素類藥物的敏感度顯著高于非嗜酸性粒細胞型。非嗜酸性粒細胞型臨床癥狀一般較輕，且合并哮喘的幾率較小，氣道炎癥較輕，且術后復發率較嗜酸性粒細胞型低，對大環內酯類藥物治療反應好。西方國家以嗜酸性粒細胞型為主，主要表現為TH2炎癥反應，而我國的嗜酸性粒細胞型和非嗜酸性粒細胞型比例均約占一半，非嗜酸性粒細胞型主要表現為TH1/TH17炎癥反應為主。綜上所述，嗜酸性粒細胞型和非嗜酸性粒細胞型在免疫病理類型、臨床癥狀、藥物治療反應和預后存在明顯不同。不同慢性鼻竇炎伴鼻息肉的炎癥/病理分型治療策略不同。所以對慢性鼻竇炎伴鼻息肉的病理分型的鑒定顯得尤為重要。

目前對兩種亞型的判斷主要依據鼻腔黏膜活檢后組織病理標本染色，缺乏無創性生物學標志物用于鑒別診斷。患者在鼻內鏡下獲得息肉標本后，進行石蠟固定等病理標本的常規處理，然后進行蘇木素伊紅的染色，接下來通過高倍顯微鏡觀察組織浸潤的炎細胞(主要的炎細胞包括嗜酸性粒細胞，中性粒細胞，淋巴細胞，漿細胞)浸潤個數，進行細胞分型。鼻腔黏膜病理活檢的缺點如下：1.為有創檢查：增加了患者的感染風險，不適用于免疫力較低人群如兒童、老年人等；取材時鼻腔出血，往往引起患者恐懼和擔憂。2.難以獲得疾病的實時動態變化信息：不能在術后對愈合期黏膜進行病理活檢。但臨床數據表明慢性鼻竇炎伴鼻息肉的病理分類會隨藥物治療、手術治療等轉歸，用治療前的病理活檢結果無法代表全部疾病時期的特征。3.費時且增加就醫成本，從獲取組織樣本到獲取病理結果一般3-4個工作日。由于無法當日或次日獲得結果，外地患者就醫等產生額外的交通費、住宿費、掛號費，增加了就醫成本。4.存在一定的人為誤差，不同的病理醫生計數的炎細胞數量有可能不同，影響息肉分型的判斷。5.組織病理切片較局限，只能反映切片位置的標本炎癥狀態，不能反映組織的全貌，可能會造成誤診。6.每張片子都需要病理科醫生人工計數，難以批量操作。